病毒DNA的提取实验——新鲜或冷冻组织中病毒DNA的提取

新鲜或冷冻组织

匀浆缓冲液裂解液

剪刀匀浆器离心机

1. 取新鲜或刚解冻的组织去除血水和结缔组织，在冰浴上剪成小碎块。

2. 将组织碎块移入预冷的匀浆器中，按 10 ml/g 加入匀浆缓冲液，混匀，制成匀浆液。

3. 将匀浆液移人 Ep 管， 5000 r/min 离心10 min, 弃上清液。

4. 加 10 mmol/L PBS(pH 7.4)悬起沉淀，每0.1g 原始组织加1ml, 5000 r/min 离心 10 min,弃上清液。

5. 加裂解液悬起沉淀，每 0.1g原始组织加1ml, 55℃作用 30~60 min,然后于95℃, 10 min灭活蛋白酶 K 。

6. 1000 r/min 离心5 min, 取上清液做 DNA 模板， 4℃保存备用。

1. 匀浆缓冲液 由 0. 25 mmol/L 蔗糖、25mmol/L Tris-HCl(pH 7.5)、25mmol/L NaCl 和25mmol/L MgCl₂ 组成。

2. 裂解液由 50 mmol/L Tri s-HCl (pH 8.3) 、1 mmol/L EDTA 、0.5 % Tween-20 和200µg/ml 蛋白酶 K 组成。