病毒DNA的提取实验

实验方法原理

实验材料 全血

试剂、试剂盒 裂解缓冲液 A裂解缓冲液 B蛋白酶 K

仪器、耗材 离心机水浴锅

实验步骤

1. 在 750µl 全血中加入等量裂解缓冲液 A,混匀， 12000 r/min 离心 30 s, 弃上清液。

2. 用 1.5mL 裂解缓冲液 A 悬起沉淀，再重复离心 1次，弃上清液。

3. 用 117µL 裂解缓冲液 B 溶解沉淀， 70℃作用 5 min, 待冷却至 55℃时加入3µL 蛋白酶 K, 并保温1h 消化细胞， 95℃ 10 min 灭活蛋白酶 K 。

4. 加入 2 mol/L 的 KCL 溶液 30µL, 冰溶 5 min 。

5. 12000 r/min 离心 5 min, 弃上清液做 DNA 模板。即获得病毒DNA。

注意事项

其他

1. 裂解缓冲液 A 由 320 mmol/L蔗糖、 10 mmol/L Tris-HCl(pH 7.6) 、 5mmol/L MgCl2和1% Triton-X-100 组成。

2. 裂解缓冲液 B由10 mmol/L Tris-HCl(pH 7.6) 、 1% SDS 组成。

3. 蛋白酶 K(25 mg/ml) ,ddH2O配制,-20℃保存。