白细胞介素8（IL8）检测实验

实验方法原理 采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株（4D7）作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8，另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。

实验材料 抗体标准品ABTS

试剂、试剂盒 缓冲液PBS

仪器、耗材 ELISA板

实验步骤

1.  包被

pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml，加入96孔板，100 μl/孔，放4 ℃，36 小时。

2.  封闭

0.1 ％吐温PBS（Buffer A）冲洗96孔板三次，加3 ％BSA Buffer A（Buffer B）200 μl/孔，放37 ℃，1 小时。

3.  加待检样品

Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/孔，放37 ℃，3 小时。

4.  加酶标抗体

Buffer A冲洗96孔板五次，3 ％PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100 μl/孔，放37 ℃，1 小时。

5.  显色

Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物（ABTS)），0.2 mg/ml，加3 ％H2O2，2 μl/ml，加入96孔板，100 μ/孔，室温下或37 ℃显色。

注意事项

1.  待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快（6小时以内）分离血清。

2.  封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。