白细胞的纯化操作方法

1．低渗处理法

        【试剂及配制】

        （1）蒸馏水

        （2）1.8%氯化钠溶液

        【操作方法】

        （1）上述各种方法所得白细胞悬液中加入1ml蒸馏水，轻轻地震荡20s，使混杂的红细胞裂解；

        （2）加等量1.8%氯化钠溶液，调至等渗；

        （3）再加Hank’s溶液混匀，离心沉淀，反复两次;

        （4）取末次沉降细胞配成所需浓度的白细胞悬液。

         2.氯化铵处理法

        【试剂及配制】

        （1）Gey溶液母液A： 称取35.0g NaCl, 1.85g KCl, 1.5g Na2HPO4.H2O，0.119g KH2PO4，5.0g 葡萄糖，和50mg 酚红，并将上列各物溶于1000ml蒸馏水中，10磅高压蒸汽灭菌15min。如果用NH4Cl 35.0g代替NaCl，补优质明胶5g，即为溶血用的Gey溶液的母液A。

        （2）Gey溶液母液B：称取0.42g MgCI2.6H2O，0.14g MgSO4.7H2O，O.34g CaCl2，并将上列各物溶于100ml蒸馏水中，10磅高压蒸汽灭菌15min。

        （3）NaHCO3溶液：称取2.25g NaHCO3,溶于100ml蒸馏水中，10磅高压蒸汽灭菌15min。

        （4）Gey应用液：取母液A 20ml,蒸馏水70ml及母液B 5ml，混合后加NaHCO3溶液5ml即成。

        【操作方法】

        （1）在白细胞悬液中加入含氯化铵的Gey应用液1ml，轻摇2min，使红细胞裂解；

        （2）加入等量的不含氯化铵的Gey应用液，离心，取沉淀细胞配成白细胞悬液。

        【注意事项】

        用上述诸法所得细胞悬液，含有较多粒细胞、单核细胞和血小板，而淋巴细胞纯度约为60～67%。