正磷酸单酯磷酸水解酶(最适碱度)。
正磷酸单酯+H2O → 醇+Pi
这个酶可以从各种渠道得来,如细菌和哺乳动物肠黏膜。每个酶分子有两个 Zn2+离子键。碱性的磷酸酶频繁地与抗体配位,例如在 Westernblots 中及酶联免疫鉴定(ELISA)中。细菌酶的最适 pH 是 8.0,哺乳动物的要较高一点(9~10)。依照反应方案,以下的实验步骤用到了增加黄色的着色强度。
对磷酸硝基苯+H2O →对硝基酚+Pi
另外,邻羧苯磷酸在碱性介质中可以用作酸性磷酸酶。
实验材料 | 酶样品 |
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试剂、试剂盒 | 甘氨酸-KOH对磷酸硝基苯 |
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仪器、耗材 | 分光光度计 |
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实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」
0.02 ml 酶样品
25 ℃ 时于 405 nm 处吸收值降低,ε405=18.5×103 l/(mol·cm)。 |
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注意事项 |
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其他 | 试剂:
0.1 mol/L 甘氨酸-KOH,pH 10.5,1 mmol/L Mg2+,0.1 mmol/L Zn2+(溶解 7.5 g 甘氨酸、203 mg MgCl2·6H2O 和 14 mg ZnCl2于 750 ml H2O 中,用 1 mol/L KOH 调节至 pH 10.5 并且用 H2O 补充至 1 L)
0.5 mol/L 对磷酸硝基苯(二钠盐,六水化合物,Mr=371.1,1.86 g 溶于 10 ml 水中)
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