比色法:这种方法利用酶促反应产生的游离酚或其衍生物与特定试剂发生颜色反应,然后通过分光光度计测定反应混合物的吸光度来评估酶活性。例如,碱性磷酸酶(ALP)可以通过在碱性条件下使磷酸苯二钠水解生成游离酚,再与4-氨基安替比林反应并形成醌类化合物,其颜色的深浅与ALP活性成正比。
连续监测法:这种方法是在碱性条件下,使磷酸对硝基苯酚(4-NPP)释放出磷酸基团,AMP参与磷酸酰基的转移,促进酶反应速率,生成游离的对硝基苯酚(4-NP),并形成黄色的醌,其吸光度的增高速率与酶活力成正比。