外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞。电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响
| 实验材料 | 真核细胞 |
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| 试剂、试剂盒 | CaCl2HEPES缓冲液氯化铯PBS |
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| 仪器、耗材 | 培养箱锥形管离心管 |
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| 实验步骤 | 1. 在转染前一天将细胞分入10 cm 组织培养平板中。当被转染的细胞是贴壁细胞，倍增时间为18~24 h时，一般按1：15从长满的培养皿中分细胞效果较好，转染的当天，细胞应在培养皿中很好地分散分布。在加入沉淀前2~4 h，用9 ml 完全培养液培养细胞。 2. 将要转染的DNA用乙醇沉淀，空气中晾干沉淀。将DNA沉淀重悬于450 μl 无菌水中，加50 μl 2.5 mol/l CaCl2。 3. 加500 μl 2×HeBS于一无菌的15 ml 锥形管中，将机械式移液器安上1 ml 吸头， 一边吹打2XHeBS，一边用巴斯德吸管逐滴加入DNA/CaCl2溶液，随即在漩涡混合器上振荡5 s，将其在室温下静置20 min 以形成沉淀。
4. 将沉淀均匀加入10 cm 平板的细胞中，轻轻晃动。 5. 在标准生长条件下培养细胞4~16 h，除去培养液，用5 ml 1×PBS洗细胞2次，加 10 ml 完全培养液培养细胞。
6. 对于短暂分析实验，可在既定的时刻收集细胞。对于稳定转化，让细胞生长两个倍增时间后分入培养皿中进行选择培养。
收起 |
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| 其他 | 
磷酸钙沉淀的形成
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