离子交换层析实验

离子混合物样本

离子交换缓冲液

离子交换层析柱 梯度混合器 电导表

1.  配制离子交换层析缓冲液，安装好层析柱，但以离子交换层析缓冲液取代其中的凝胶过滤缓冲液。

2.  用起始梯度的缓冲液溶解含蛋白质混合物的样品。

3.  弃去柱床上部的大部分缓冲液，并将样品加在凝胶的顶上。只要样品的离子强度不超过起始缓冲液的离子强度，上样体积不限。

4.  让样品流入凝胶柱床，并用缓冲液冲冼层析柱的内壁，用吸管往凝胶的顼上 加一层1 cm 高的缓冲液。

5.  连接梯度混合器，分部收集100个级分，每个组份相当于约1%总禅度体积。测各组分的A280以确定蛋白峰的所在，用电导表测离子强度以确定禅度的形状。

1.洗脱液体积应足够大，一般要几十倍于床体积，从而使分离的各峰不至于太拥挤。

2.梯度的上限要足够高，使紧密吸附的物质能被洗脱下来。

3.梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。

1.离子交换剂的再生与保存离子交换剂可在柱上再生。如离子交换纤维素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有强吸附物则可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物质则可用非离子型去污剂洗柱后再生，也可用乙醇洗涤，其顺序为：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存离子交换剂时要加防腐剂。对阴离子交换剂宜用0.002%氯已定（洗必泰），阳离子交换剂可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些产品建议用0.02%叠氮钠。