1、原理：
（1）计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。
（2）血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber中细刻9个1mm2大正方形，其中4个角落之正方形再细刻16个小格，深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml中之细胞数目。
（3）存活测试之步骤为dyeexclusion，利用染料会渗入死细胞中而呈色，而活细胞因细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue染料，如果细胞不易吸收trypan blue，则用红色之Erythrosin bluish。
2、材料：
0.4%w/v trypan blue（GibcoBRL15250-061）；Erythosin bluish stain；取0.1gram Erythrosin bluish（SigmaE-9259）及0.05gram preservative methyl paraben（SigmaH-3647）溶于100mlCa++/Mg++freesaline；血球计数盘及盖玻片（Hemocytometerandcoverslip）；计数器（counter）；低倍倒立显微镜；粒子计数器（Coultercounter,CoulterElectronics）。
3、步骤：
（1）取50μl细胞悬浮液与50μl trypan blue（orErythrosinbluish）等体积混合均匀于1.5ml小离心管中。
（2）取少许混合液（约15μl）自血球计数盘chamber上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100倍倒立显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞则为蓝色（或红色-Erythrosin bluish）。
（3）计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数（至少乘以2，因与trypanblue等体积混合），zui后乘以104，即为每ml中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上，只计上线与右线之细胞（或计下线与左线之细胞）。
注：4大格细胞总数×稀释倍数×104/4=细胞数/ml；每一大格的体积=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml
4、范例：
T75 monolayer culture制成10ml细胞悬浮液，取0.1ml溶液与0.1ml trypan blue混合均匀于试管中，取少许混合液加入血球计数盘，计数四大方格内之细胞数目。
活细胞数/方格：55，62，49，59；死细胞数/方格：5，3，4，6；细胞总数=243
平均细胞数/方格=60.75；稀释倍数=2
细胞数/ml：60.75×104×2（稀释倍数）=1.22×106
细胞数/flask（10ml）：1.22×106×10ml=12.2×106
存活率：225/243﹦92.6%