简单概述真皮成纤维细胞的制备培养步骤

　真皮成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。细胞来源于皮肤组织，是一种贴壁培养方式的细胞，由于这些细胞非常容易培养，它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。

　　成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

　　一般而言，成纤维细胞能够分泌I型和III型胶原等细胞外基质，并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型，同时，它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。

　　真皮成纤维细胞的制备方式：

　　1、首先在分离的细胞时要做到在无菌条件下进行，打开生物安全柜紫外灯进行30min作无菌处理。

　　2、将手术废弃的皮肤组织浸泡75%酒精，消毒2min。

　　3、将皮肤组织置含P/S的PBS中清洗至少3遍，然后用眼科剪除去脂肪及结缔组织等。

　　4、将皮肤剪成0.5*0.5cm小块，放入dish中，加0.1%的dispase溶液，封口膜封口，4℃冰箱过夜消化。

　　5、24小时后用镊子将表皮与真皮分开（薄的那层是表皮，厚的那层是真皮），

　　6、将真皮剪碎，移至离心管，用0.1%胶原Ⅰ型酶+0.1%胶原Ⅱ型酶+0.1%胶原Ⅳ型酶+37℃水浴锅中消化至少2h（视消化程度而定）。

　　7、用100μm网筛过滤，取滤液，300g，离心5min，用完全培养基重悬沉淀（每隔一天都必须换液）。

　　以上是真皮成纤维细胞分离培养的一种方式，不同的技术人员分离培养的方法也不同，使用的试剂比例也不尽相同。细胞纯度可高达于90%，所有的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。