紫外可见分光光度计的应用——定量分析

一、定量分析方法
( 一) 绝对法
    目前, 绝对法是紫外可见分光光度计诸多分析方法中使用最多的一种方法。这是一种以比耳定律A =εbC为基础的分析方法, 某一物质在一定波长下ε值是一个常数, 石英比色皿的光程是已知的, 也是一个常数。因此, 可用紫外可见分光光度计在λm ax 波长处, 测定样品溶液的吸光度值A。然后, 根据比耳定律求出C= A/ εb, 则可求得该样品溶液的含量或浓度。
( 二) 标准法
    在选定的波长处, 在相同的测试条件下, 分别测试标准样品溶液C标和被测试样品溶液C样的吸光度A标和A样。然后, 按下式求得样品溶液的浓度或含量。

    比吸收系数法多用于测定样品溶液的浓度。但是, 根据比耳定律, 被测试样溶液的浓度与吸光度应成直线关系, 而在实际测试中, 如果试样的浓度较高, 会发现实际测量到的吸光度值偏离线性关系。这种偏离比耳定律的原因,是由于紫外可见分光光度计的杂散光、噪声、基线平直度和光谱带宽, 以及试样的前处理、试样的化学平衡等所引起的。因此, 一般情况下, 不采用这种方法。
( 四) 标准曲线法
    紫外可见分光光度计最常用的定量分析方法是标准曲线法。即先用标准物