红细胞C3b受体花环试验

实验概要

近年来的研究表明红细胞也是一类免疫细胞。红细胞免疫功能主要是藉助其膜表面分子(如CR1、CR3、CD58、CD59、DAF、SOD酶等)的免疫粘附作用，在体内起清除垃圾的"清道夫"作用。本实验介绍了红细胞C3b受体花环及免疫复合物花环试验。

实验原理

红细胞膜上C3b受体可与补体致敏的酵母菌粘附形成花环(RBC-C3bR花结)；红细胞膜上粘附的IC中C3b分子可与未致敏的酵母菌粘附形成花环(RBC-IC花环)。

主要试剂

1. 补体致敏的酵母菌试剂：将酵母菌用生理盐水洗涤3次后，配成1％悬液，置水浴内煮沸20min，充分混匀。用二层定性滤纸(或16层纱布)过滤，除去小凝块，在低倍镜下呈单个酵母菌细胞分散状态。加等量小白鼠血清，混匀后置37℃水浴致敏15min。用生理盐水洗涤一次，2500r/min离心10min。去尽上清，用生理盐水重混悬。计数后配成1×10⁸/ml补体(C3)致敏的酵母菌悬液。

2. 瑞氏法染液

实验材料

待测红细胞悬液：将肝素抗凝的指血或静脉血用生理盐水洗涤离心3次，2000r/min离心3～5min，计数后配成1.25×10⁷/ml 红细胞悬液备用。

实验步骤

1. 取两支小试管，每管加待测红细胞悬液100ｕl，第一管再加补体致敏酵母菌悬液100ｕl，第二管加未致敏的酵母菌悬液100ｕl，摇匀放37℃水浴30min；

2. 取出用手腕轻轻摇匀，加生理盐水200ｕl；

3. 混匀后，再加0.25％戊二醛75μl并轻轻混匀；

4. 分别取1/3量水平涂片、吹干、加甲醇固定；

5. 用瑞氏法染色，油镜下计数。涂片染色后RBC为红色，酵母菌为蓝色。