纳米级流式细胞仪在细胞外泌体、微囊泡研究中的应用

外泌体是一种纳米级囊泡，几乎所有类型的细胞，包括癌细胞都可以释放外泌体。作为细胞间通讯的重要介质，外泌体介导了蛋白质和遗传物质的交换，越来越多的证据表明，宿主细胞或癌细胞分泌的外泌体参与了肿瘤发生，生长，侵袭和转移。并且免疫细胞和癌细胞自身通过外泌体进行通讯在调节肿瘤免疫中发挥了双重作用。

近年来的研究成果表明，外泌体循环微粒是促成心血管炎症、堵塞与损伤的因素。而过往由于常规设备在微小颗粒检测上的局限性，使循环微粒这一重要因素被排出在病因分析之列。普瑞麦迪公司引进的Apogee纳米级超高分辨率流式细胞仪，独有的80nm散射光分辨率及10nm的灵敏度，首次突破外泌体与微囊泡研究瓶颈，引领前沿科学研究大爆炸！   1、微小循环微粒检测----创新性突破

针对常规设备在外泌体研究上的局限性，2013年2月份，伯明翰大学心血管科学研究中心的Shantsila  E，Gregory Y. H. Lip和阿姆斯特丹大学血管医学系的Kamphuisen共同发表了题为“Circulating  microparticles in Cardiovascular Disease:implications for atherogenesis  and atherothrombosis”的综述性文章。

而在接触Apogee纳米级流式细胞之后的短短一个月即2013年4月份，伯明翰大学心血管科学研究中心（Gregory  Y.H.  Lip等）与西班牙穆尔西亚维尔根－达阿里克萨卡医院心血管中心，利用Apogee独有的80nm超高分辨率及10nm超灵敏性检测了所研究的循环微粒，获得了一些非常有价值的新数据，取得了意想不到的效果，并将该科研成果的论文“Small-size  circulating microparticles in acute coronary syndromes: Relevance to  fibrinolytic status, reparative markers and outcomes”  在《Atherosclerosis》杂志上成功发表 。  

 图1.心血管病相关循环微粒形成与运输途径    2、外泌体/微囊泡检测------高精准分析
（Journal of Extracellular Vesicles 2015, 4: 25530）

常规流式细胞仪做为一个强大的工具，被直接用于细胞外囊泡（EV）和外分泌体的检测，但受到几个挑战性的阻碍，最大的限制是这些囊泡很小（外分泌体80-200   nm，微囊泡200-1000nm），且多分散性，折射指数低；在采用亲脂性染料PKH67和抗体标记时，即使采用商业化高端流式的优化版做分析，也需要有丰富流式操作经验并能手动调整硬件和校正仪器的人员才能完成实验，且仪器的分辨率有限，导致检测结果常常不准确。

Apogee   A50纳米级超高分辨率流式细胞仪，因其独有的80纳米散射光分辨率及10nm的高灵敏度性能，可对来自细胞培养介质及复杂的人体样本中分离的外分泌体及微囊泡做量化与特异性分析（如：卵巢癌病人的腹水）。其专门设计用于微小颗粒检测及多用途实验的分析系统，在数据获取前无需校正，EVs可用荧光蛋白（CFSE）或脂质（FM）特异染料标记，无需通过UC去除没有偶联上的荧光染料，进一步加速流式细胞仪对微囊泡和外泌体的特征检测，突破了传统流式细胞仪对外泌体的检测仅仅局限在大小参数，无法区分颗粒的构成（例如蛋白的总量，微粒体，脂蛋白性质或特定蛋白的丰度等），而常导致胞外囊泡数量高估的局限。  Apogee A50为外分泌体与微囊泡提供了一种新颖快速的研究方法。
图2. 微小颗粒检测bead验证 图 3.正常细胞与癌变细胞外泌体检测结果对比，结果显示高精度外泌体/微囊泡检出率   Apogee A50 纳米级流式对外泌体/微囊泡检测优势大展示 亮点一：独有的散射光灵敏度80nm及分辨率10nm， 高于传统流式10倍，最高3激光及12检测器，并可加配自动进样器

亮点二：高浓度样本（10⁹ cell/mL）直接检测，浑浊液亦可直接上样

亮点三：宽样品检测范围 10²-10⁹cell/mL

亮点四：独特的时间戳功能 随时监测实验结果准确性，放弃不合理数据

亮点五：超精确样本控制功能 最低流速可达0.7 uL/min

亮点六：超高恒定性能  荧光通道CV值≤1.5%