细胞凋亡中Caspase-3活性的检测主要应用于（1）酶的活力测定（2）细胞凋亡指标检测。
| 实验方法原理 | Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。 |
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| 实验材料 | 细胞 |
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| 试剂、试剂盒 | 磷酸缓冲液蒸馏水脱脂奶粉Caspase-3多抗吐温Ac-DEVD-AMC |
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| 仪器、耗材 | 硝酸纤维素膜PVDF膜荧光分光光度计UV流式细胞计烧杯移液管引流棒 |
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| 实验步骤 | 1、收集细胞；
2、PBS洗涤；
3、抽提细胞裂解液；
4、蛋白定量；
5、SDS-PAGE电泳，硝酸纤维素膜或PVDF膜转移，5%脱脂奶粉封闭，室温1.5——2h或4°C过夜；
6、Caspase-3多抗或单抗室温反应1——2h或4℃过夜，TBS-T（含0.05% Tween 20的TBS）洗3次，5——10min/次；
7、HRP-标记的羊抗鼠IgG或AP标记的羊抗鼠IgG室温反应1——2h→ TBS-T洗3次， 5——10min/次；
8、ECL显影或NBT/BCIP显色。 展开 |
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| 注意事项 | 1. 整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞；
2.反应完毕后尽快在一小时内检测。 |
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| 其他 | 1. 结果采用Western blot 分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspase-3及对底物多聚（ADP-核糖）聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase，PARP]等的裂解。
2. 此外还有荧光分光光度计和流式细胞术分析法。 |
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