| 实验方法原理 | Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。 |
|---|---|
| 实验材料 | 细胞 |
| 试剂、试剂盒 | 磷酸缓冲液 蒸馏水 脱脂奶粉 Caspase-3多抗 吐温 Ac-DEVD-AMC |
| 仪器、耗材 | 硝酸纤维素膜 PVDF膜 荧光分光光度计 UV流式细胞计 烧杯 移液管 引流棒 |
| 实验步骤 |
1、收集细胞； 2、PBS洗涤； 3、抽提细胞裂解液； 4、蛋白定量； 5、SDS-PAGE电泳，硝酸纤维素膜或PVDF膜转移，5%脱脂奶粉封闭，室温1.5——2h或4°C过夜； 6、Caspase-3多抗或单抗室温反应1——2h或4℃过夜，TBS-T（含0.05% Tween 20的TBS）洗3次，5——10min/次； 7、HRP-标记的羊抗鼠IgG或AP标记的羊抗鼠IgG室温反应1——2h→ TBS-T洗3次， 5——10min/次； 8、ECL显影或NBT/BCIP显色。
展开 |
| 注意事项 |
1. 整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞； 2.反应完毕后尽快在一小时内检测。
|
| 其他 |
1. 结果采用Western blot 分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspase-3及对底物多聚（ADP-核糖）聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase，PARP]等的裂解。 2. 此外还有荧光分光光度计和流式细胞术分析法。
|
澳大利亚沃尔特和伊丽莎·霍尔医学研究所科学家发现了一种小分子，能够选择性抑制细胞凋亡。这一发现为治疗帕金森病和阿尔茨海默病等神经退行性疾病开辟了新途径。相关研究论文发表于最新一期《科学进展》杂志。BA......
2月13日，中国科学院广州生物医药与健康研究院副研究员孙益嵘团队和美国加州大学洛杉矶分校科研人员合作，在《细胞死亡和分化》（CellDeath&Differentiation）上发表了题为ST......
细胞凋亡（Apoptosis）和细胞焦亡（Pyroptosis）等自然死亡途径具有双重作用——它们通过抑制或刺激炎症来消除有害细胞，并调节免疫系统。在靶细胞中触发特定细胞死亡程序的合成蛋白回路同样可以......
中山大学附属口腔医院施松涛团队和中国科学院生物物理研究所陈畅团队合作，揭示硫化氢介导的蛋白硫巯化修饰调节免疫稳态机制。12月18日，相关成果以封面文章形式在线发表于《细胞代谢》。《细胞代谢》杂志202......
硫化氢（H2S）是机体第三类气体信号分子，对机体骨稳态和免疫稳态具有重要作用。细胞凋亡过程中，可释放一类特殊的细胞外囊泡，称为凋亡囊泡。凋亡囊泡具有良好的免疫调节和促再生作用，而凋亡缺陷会导致严重的自......
2015年初，英国格拉斯哥大学StephenW.G.Tait团队报告了一个不同寻常的发现。当他们将新型成像系统对准低剂量细胞凋亡剂处理的细胞时，他们意外地发现，标志着细胞要快速死亡的“线粒体外膜透化”......
10月4日，中国科学院武汉病毒研究所/病毒学国家重点实验室周溪团队在《科学进展》（ScienceAdvances）上，发表了题为HumancytomegalovirusUL36inhibitsIRF3......
高致病性的冠状病毒感染会引致严重的细胞凋亡，但细胞凋亡对于冠状病毒的致病性所产生的生理病理意义至今仍未得到清楚阐释。展开对冠状病毒致病性以及相关宿主通路的研究，对于解释致病机制以及阐释病毒性感染的进程......
神经退行性疾病是影响人类身体健康的重大疾病，但目前还没有有效的干预措施。神经退行性疾病（ND），比如阿尔兹海默症（AD）和渐冻症（ALS），有几个重要的病理特征：一是小胶质细胞介导的神经炎症；二是神经......
作为一种传统中药，灵芝的不少药用机理还需要通过科研阐明。近期，中科院合肥物质科学研究院黄青研究员课题组在灵芝抗癌药理研究方面取得新发现，灵芝酸可以诱导食管鳞癌细胞凋亡和自噬性细胞死亡。图片......