细胞凋亡综述2

在凋亡早期，活化的Caspase-3是主要的功能蛋白酶。凋亡细胞内，32kD的原酶裂解为17kD和12kD的亚单位，两个亚单位组成二聚体，即活化的Caspase-3，活化的Caspase-3进一步水解活化其它Caspase酶及胞浆内目标（如D4-GDI）和核内目标（如PARP）。
Bcl-2家族
Bcl-2家族在控制凋亡信号引起的细胞反应中，起了重要作用。Bcl-2在很多细胞中可以阻断凋亡，引发肿瘤，因而被认为是一种原癌基因。 Bcl-XL、Mcl-1和A1是凋亡的抑制剂，但另一些，如Bad、Bak、Bax和Bcl-XS，可以引起细胞凋亡。Bcl-2家族蛋白间的相互作用可能有很重要的功能作用。例如，Bax可以形成二聚体或与Bcl-2和Bcl-XL形成异二聚体。Bax二聚体可以引发细胞死亡，而Bax异二聚体可以阻止细胞死亡。Bad是一个前凋亡信号，只能与Bcl-2和Bcl-XL形成异二聚体。Bad与Bcl-XL形成异二聚体后，Bad可以替换Bax- Bcl-XL二聚体中的Bax单位，进而促进细胞死亡。在体外，发现Bcl-2家族可能还对离子通道有影响。

Annexin V检测凋亡细胞的质膜变化

细胞发生凋亡时会有一系列的形态学特征性改变，其中，质膜的改变是早期凋亡的特征之一。细胞发生凋亡时，胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）从胞膜内侧翻转到外侧，暴露于细胞外表面。Annexin V是一个35-36kD的Ca2+依赖性的磷脂结合蛋白，它与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，可以与细胞外暴露的磷脂酰丝氨酸结合。Annexin V标记上FITC、PE或生物素，可以在流式细胞仪上灵敏地检测凋亡细胞。

DNA断裂碎片

细胞凋亡晚期的改变之一是DNA断裂降解：首先是调亡程序启动核酸内切酶活化，核酸降解，最终形成200bp左右的DNA片段。常用的一种检测 DNA断裂碎片的方法是外源性TdT酶催化反应，即所谓的“End-Labling”或“TUNEL”染色。

凋亡相关蛋白——Tumer Suppressors

肿瘤抑制基因的生理功能是调控细胞繁殖。许多肿瘤抑制因子参与细胞间信号传递系统，使细胞从其周围获得并处理生长/抑制信号。如果一个细胞中，某一个关键信号表达缺失，这个细胞就会对生长/抑制信号失去反应性，继续进行细胞增殖。这种由于肿瘤抑制基因的正常功能表达缺失导致的细胞生长失控，会导致细胞增殖失控和肿瘤形成。

P53是一个53kD的核内磷蛋白，是一种肿瘤抑制蛋白，在细胞DNA发生破坏时，可以抑制细胞增殖。在人类肿瘤中，常发现伴有P53基因的突变：大肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胆囊癌等常发生P53基因错意突变。突变的P53在许多癌变细胞内有过渡表达，野生型P53可以与一些病毒性癌基因（包括 SV40 large T、腺病毒的E1B、人类乳头状病毒的E6等）结合，形成特异性的复合物。当DNA损伤发生在细胞周期中的G1/S期时，野生型P53是重要的 Checkpoint Protein。但是，目前仍不清楚点突变型的P53是否只是无意突变，或有功能改变。

视网膜母细胞瘤基因（Retinoblastoma Gene，Rb）编码蛋白是一种核内磷蛋白，它在脊椎动物的大部分正常细胞中均有表达，具有肿瘤抑制功能。在静止或分化完全的细胞中，Rb常以缺乏磷酸化的形式存在；而在增殖细胞中，Rb则常以过磷酸化的形式存在。缺乏磷酸化形式的Rb可以与一些病毒性癌基因（包括SV40 large T和腺病毒的E1A、HPV-E7）结合，这种结合作用可能造成这些病毒致癌蛋白的变形活化。另外，Rb也可以与一些Cyclin（如CyclinA、 D、E以及E2F）相互作用。因此，Rb在控制细胞分裂繁殖方面，起了很重要的作用。

细胞凋亡

凋亡（apoptosis）, 程序性细胞死亡（programmed cell death,PCD）

生理性细胞死亡。

第一节 细胞凋亡概论

一、凋亡与坏死apoptosis vs. necrosis）

凋亡是一个受细胞主动调节的自身消化过程，凋亡细胞的特征形态学改变使其可被其它细胞吞噬而不泄露胞质内容物，不会引起炎症反应。

坏死是由于物理损伤、缺血或细菌毒素等引起的破坏性细胞死亡过程，细胞内容物的释放导致局部炎症反应