细胞划痕实验

细胞样品

无血清培养基 PBS

6孔板 marker笔 直尺 枪头

一.准备：
所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）

二.流程：
1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2.在空中加入约5X10⁵个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。
5.放入37度5%CO₂培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。

下面是照片，细胞NIH3T3
0h

6h

12h

24h

1.划痕法测量适用的细胞范围较小，一般只适用于上皮细胞，纤维样细胞。

2.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。