细胞又双叒叕污染了，怎么解决？

在细胞培养过程中，广大科研工作者一直饱受微生物污染的困扰，几乎所有科研单位的细胞房都曾经遭受过细菌、真菌、支原体、黑胶虫的污染，尤其是一些珍贵的细胞种子，一 旦招惹上这几个家伙，甚至面临“绝种”的危险。针对细胞培养当中面临的蕞普遍的问题，作为科研工作者的我们必须清楚认识这些微生物，并通过技术手段判断细胞遭受了哪种污染， 准确的对症下药，才能为我们的细胞保驾护航。

1 细菌污染

1.1 细菌污染的鉴别

细菌污染是细胞培养当中最常出现的污染类型，枪头不小心碰到瓶壁、手不小心从培养瓶口处穿过、培养基倒入培养瓶等等，不经意的一个小动作，都可能会造成细菌污染，以致于实验前功尽弃。 细菌污染在没有爆发或培养体系中含有双抗时，细菌污染较容易被科研工作者忽视，黑点在显微镜下一穿而过，小黑点因为数量少且移动迅速而不易发现。随着细菌在培养体系中的增多或者体系中撤掉双抗以后，细菌可以从镜下明显识别，会呈现黑色条状、棒状、球状， 培养基的外观也会发生明显的变化，培养基变浑浊，有细沙状沉淀，有时会伴有臭味。

1.2 细菌污染的解决方式

一般的细胞培养体系中，普遍采用双抗或者三抗进行细菌的预防，但这两者存在一定的局限性，比如只能预防，而不能拯救已经细菌污染的细胞。另外，很多科研工作者从事原代的细胞分离和培养工作，在从动物身上取材并分离培养的过程中，极易造成细菌污染，如果只是加入双抗或三抗进行冲洗组织，细菌污染无法避免，造成了珍贵动物组织的浪费。

使用细胞污染高效清除剂

iCell 细胞污染高效清除剂，不仅兼具双抗或三抗预防细菌的功效，还可以清除支原体污染，有效消除真菌和细菌的污染，只需 1-3 天就可显着抑制支原体、真菌、细菌的增殖， 本产品经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，wan美兼具高效和广谱清除细胞污染物的能力，对细胞生长几乎无影响，大程度上挽救您的细胞。

2.真菌污染

2.1 真菌污染的鉴别

实验室污染的真菌一般为三类：念珠菌、酵母菌、霉菌，细胞污染真菌通常不易察觉，只有霉菌会逐渐出现细丝团状漂浮物，较容易从外观发觉污染，其他真菌污染不像细菌污染培养基会浑浊，污染后培养液清澈透亮，与未污染的细胞从外观上看无明显变化。

在显微镜下比较容易判断污染类型，念珠菌呈卵圆状，在细胞周边生长，酵母菌出芽生殖时有明显的一大一小连体结构，霉菌可观察到菌体，菌丝呈丝状、管状、树枝状。

2.2 真菌污染的解决方式

真菌污染由于不容易通过培养基的变化来判断，一般发现时就是已经爆发了，镜下会出现明显团状或黑色丝状污染物，细胞状态明显变差，很难救活。传统的预防真菌污染的方式为培养体系中加入三抗，但是一旦发生真菌污染，三抗对于明显的真菌污染就显得心有余而力不足，此时建议如果是还留存种子的细胞就立刻扔掉，彻底消毒灭菌细胞房和 CO2 培养箱，扔掉可能被污染的培养基，对用过的实验器材进行灭菌。

使用真菌清除剂

真菌清除剂用于防止细胞培养过程中的真菌（包括酵母）污染，还可用于消除细胞培养物中的真菌（含酵母）污染。疗效远超真菌抗生素两性霉素 B，对细胞培养过程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的疗效。

真菌清除试剂经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，只需 1-3 天就可以抑制真菌增长。对细胞基本无害，具有高效、特异性杀灭的特点，大程度上挽救珍贵的细胞，减少真菌污染带来的损失。

3 黑胶虫污染

3.1 黑胶虫污染的鉴别

“黑胶虫”是一种常见的细胞污染物，与细胞共生，随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，对细胞生长不利，严重时导致细胞死亡。目前很多细胞存在被“黑胶虫”污染的现象，对细胞培养及其后续实验造成了极大地影响。

“黑胶虫”污染的细胞常见的特性有以下几点：

（1）培养基不浑浊，但在显微镜下观察细胞时，细胞周围和培养液中有很多“小黑点”， 且随着培养时间的延长“小黑点”逐渐增多，更换培养液或洗涤细胞不能将其去除；

（2）“黑胶虫”污染的细胞，营养消耗快，需要频繁更换培养液；

（3）“黑胶虫”污染的细胞生长缓慢，细胞状态差，空泡化严重，甚至还可能导致细胞形态的改变。

3.2 黑胶虫污染的解决方式

对于黑胶虫污染的细胞，最为快速有效的处理方式就是采用黑胶虫清除剂对黑胶虫进行清除，同时确保培养体系中的血清必须为无黑胶虫和原虫污染的优质血清。

使用黑胶虫清除剂

黑胶虫清除试剂用于清除细胞培养过程中产生的“黑点”，只需 1-3 天就可以显着抑制“黑点”生长，一周左右即可清除“黑点”。

本产品经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，对细胞生长无明显影响，具有高效、特异性杀灭的特点，可显着清除黑胶虫污染，大程度上挽救珍贵的细胞。

4 支原体污染

4.1 支原体污染的鉴别

支原体直径约为 0.1-0.3 μm，具有变形能力，可透过常见过滤膜（0.22-0.45 μm），因此常规的无菌过滤方法不能将其去除，常用的抗生素也对支原体无效。

支原体污染是细胞培养领域的一个世界性问题，世界各国细胞系支原体污染的平均比例为 30-60%。支原体可通过细胞之间交叉污染，操作人员的口腔、皮肤造成污染，或者血清等添加物而带入污染。

支原体在光学显微镜下不可见，一般不会引起培养物混浊，因此细胞被支原体污染一般难以察觉。

支原体会消耗必须氨基酸，影响细胞生长速率，促进代谢物积累，改变细胞形态，影响 DNA、RNA 以及蛋白质的合成，抑制细胞因子表达，改变被污染细胞的基因表达谱，诱导染色体畸变。