细胞培养基础知识冷冻细胞活化

1. 冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。

2. 细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常 ( 例如产生单株抗体或是其它蛋白质 ) 。

3. 材料

3.1 37 oC 恒温水槽

3.2 新鲜培养基

3.3 无菌吸管 / 离心管 / 培养瓶

3.4 液氮或干冰容器

4. 步骤：

4.1 操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。

4.2 自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。

4.3 将新鲜培养基置于 37 °C 水槽中回温，回温后喷以 70 % 酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。

4.4 取出冷冻管，立即放入 37 °C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化，以 70 % ethanol 擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。

4.5 取出 0.9 ml 解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内 ( 稀释比例为 1:10 ～ 1:15) ，混合均匀，放入 CO2 培养箱培养。另取 0.1 ml 解冻细胞悬浮液作存活测试。

4.6 解冻后是否立即去除冷冻保护剂 ( 例如 DMSO 或 glycerol) ，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有 5-10 ml 培养基之离心管内，离心 1,000 rpm, 5 分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入 CO2 培养箱培养。

4.7 若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后隔日更换培养基。