原代细胞保存温度越低,保存时限更长;温度越低,对细胞伤害越大;低温也不怕,我有防冻剂(e.g.甘油)。下面的表格就是五种常见保存细菌细胞的方法和大约时限。
保存条件 温度°C 大约时间
琼脂平板 4 4-6周
(AgarPlate)
穿刺培养基 4 3周-1年
(stabculture)
冰冻 -20 1-3年
超低温冰冻 -20 1-10年
冻干 ≤4 15年+
但是,具体到你用的那一种菌用什么方法保存能够保存多长时间,就要视情况而定了,并没有一个*答案,上表中所列出来的时限一般来说是适用大部分细菌样本的。小编如果要保存一个细胞样本,一般不会费时费力来查这个表的,那怎么办?问师兄,找师姐咯~
短期保存
上表中的琼脂平板和穿刺培养基都适合于短期保存。这两种方法都保存在4度冰箱,为避免杂菌,用塑料或封口膜(parafilm)对平板或培养瓶进行封口,这样可以拒绝冰箱内本身存在的杂菌、霉菌入侵样本,也可以防止自己的培养基过快失水而变得干燥。小编就曾有一盘放在4度冰箱的菌落样本,忘记了封口,一个月后,菌落和琼脂都变成了木乃伊T_T
长期保存
长期低温冰冻必然会导致部分细胞死亡,而且很多时候我们要把原代细胞样本拿来重新接种做实验,所以解冻再冻的过程也会导致细胞死亡。那么起始样本的细胞浓度就要达到一定的高度,这样在以后保存的过程中就算死亡一些细胞,我们也还有很多有效细胞可以用,一般来说这个起始细胞密度要达到10的七次方的样子(单位:细胞/mL)。
除了常见抗冻剂甘油外,我们也会添加多糖(polysaccharide)或者葡聚糖(dextran)或某些蛋白质用来吸附在细胞表面形成保护薄膜,防止在冷冻过程中对细胞的破坏。
另外在解冻细胞样本的时候,在低温条件下,不要让整个细胞样本解冻成液体,只要解冻到少量液态样本出现就好。这样也可以帮助更多的样本存活过一次解-再冻的过程,方便下次或多次使用。
关于冻干保存,其实并不是所有的细菌都适合冻干,有的原代细胞没法在冻干过程中存活。所以如果你实在需要超长时间保存(超过十年)你的样本,一定要自己验证一次,看冻干细胞再培养能不能成功。
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