细胞感染方法

  细胞我们实验室不可缺少的实验产品之一，那么细胞感染是什么东西引起？有了细胞感染要注意那么方面？今天就为大家分析细胞感染的方法。

（一）细胞准备
将状态良好的目的细胞接种到24孔板，使细胞浓度为 1×10⁵/ml 细胞，接种细胞数量因细胞的生长速度而略有不同， 一般是保证第二天进行病毒感染的时候细胞汇合率介于 50%至70%之间。
（二）病毒感染
1.感染细胞zui佳MOI 的测定MOI（Multiplicity of Infection，感染复数）是指每个细胞感染的病毒数，通常MOI 越高，病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。对于分裂活跃的细胞，比如 Hela、293 细胞，MOI=1～3 时，80%以上的细胞均表达目的基因。而对于非分裂细胞，比如原代细胞，感染效率较低。需要进行MOI梯度摸索实验，选择适合的MOI 进行实验。
2.感染步骤
按实验需要将细胞铺板（比如12孔板）；细胞数以第2天密度约50%为宜；37℃ 培养过夜。
    对于Polybrene 可施加的细胞：准备完全培养基和 Polybrene混合物，Polybrene 终浓度为摸索得到的zui适终浓度。移去培养基并添加 0.5 ml Polybrene/培养基混合物于每孔中（适用于24 孔板，其他孔板请相应调整体）。
对于不适用 Polybrene 的细胞，以上步骤省略，直接进入下面步骤：
    感染前，从冰箱取出并在 37℃水浴中快速融化病毒，吸去细胞原有培养基，将病毒原液加入细胞中，轻轻8字混匀。感染后第二天（约12小时），吸去含病毒的培养液，换上新鲜的完全培养液，继续37℃培养。感染后48小时，对于带 GFP报告基因的病毒，可通过荧光显微镜观测GFP表达效率，对于携带 Puromycin抗性基因的病毒，换上含适当浓度的 Puromycin 的新鲜完全培养液，筛选稳定转导的细胞株。