细胞名称：PK-15(猪肾细胞)
细胞别称： PK(15); PK (15); PK 15; PK15; Porcine Kidney-15
细胞货号: SNL-131
生长特性: 贴壁
培养条件: DMEM+10% FBS+1% P/S
培养环境: 空气，95%；二氧化碳 (CO2)，5%
细胞简介: PK-15细胞是由Stice·E于1955年从成年猪的肾脏中分离后建系的，是PK-2a细胞的克隆系。PK-15细胞猪圆环病毒（PCV）抗原阳性，表达纤溶酶原激活剂、角蛋白，可用于多种病毒的增值及特性研究。电镜观察发现，PK-15细胞内有C-型病毒颗粒存在，是研究C-型病毒的材料。美国农业部的外国动物疾病诊断实验室已经确定ATCC CCL-33没有感染霍乱病毒或非洲猪瘟病毒，可以用来筛选这些病毒。
PK-15(猪肾细胞)特点
01 细胞贴壁较强
细胞贴壁略偏强，消化时易出现消化时间偏长现象，注意一定要消化到细胞可以轻轻吹下，再加终止液终止消化；
02 细胞颗粒比较多
该细胞培养过程中代谢会产生较多颗粒物，细胞内部及细胞周边可以明显看到很多颗粒，此为该细胞正常现象，并不代表细胞状态不佳或污染；消化操作不规范、培养条件不适等会导致细胞颗粒进一步增加，严重的可能会出现细胞不长甚至死亡，对环境和操作要求偏高；
细胞颗粒较多时可以收集细胞后低速离心并用PBS重悬后再低速离心，重复1-2次后再接种到新的培养瓶中；
03 细胞消耗培养基偏快
细胞培养基消耗速度偏快，必须多加点培养基培养细胞，T25瓶加10-12ml完全培养基，10cm皿加12-15ml，2-3天换液一次；
细 胞 收 货 攻 略
常温细胞
1.T25瓶收货后，拆开外包装，用75%酒精消毒T25瓶表面，放37℃培养箱静置4h以上；
2.吸走大部分培养基并留10-12 ml，显微镜下拍照保存细胞状态照片，观察细胞密度，若细胞密度大于80%即可按比例传代（首次传代比例建议1：2），若细胞密度低于70%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上再进行传代培养；
冻存细胞
1.细胞收货后尽快开箱检查，若干冰充足可以取出细胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天内复苏）短期保存或液氮中长期保存，若干冰完全挥发建议立即复苏细胞并联系销售人员解决；
2.冻存细胞建议尽快复苏一管培养检查，以免超出售后期，复苏步骤参考复苏攻略；
3.复苏一管细胞出现异常及时联系销售人员，在专业技术支持的指导下进行下一步操作；
TIPS:
1.细胞收货出现漏液、培养瓶破损、干冰完全挥发等异常情况时，及时拍照联系销售人员；
2.该细胞运输过程中由于条件不适，颗粒可能会增多，一定要充分平衡细胞后再处理，有条件的建议放培养箱过夜再处理细胞；
3.尚恩生物T25瓶发货的细胞内含对应细胞的完全培养基，可以收集原装培养瓶内培养基经1500rpm离心5min后，取上清于4℃保存用于后续细胞培养；
细 胞 传 代 攻 略
1. 先尽量吸干净T25瓶原培养基，再加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；
2. T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层，将培养瓶放入37度培养箱消化；
3. 消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；
4. 混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；
5. 加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里，补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；
TIPS:
1. 该细胞对消化时间偏长，注意略微延长消化时间；
2. 对于消化细胞程度，客户如果经验不多，无法准确掌控胰酶作用时间，建议客户按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，放入37度培养箱，然后每隔30秒，即吹打下细胞（此时吹打细胞应尽量轻柔，不能强行将细胞吹下，否则细胞可能出现机械损伤），如果能够吹打散细胞，说明细胞消化完成可以终止消化，如果30秒吹打不下，再等30秒重复操作直至能够轻柔的吹下细胞；
3. T25瓶加10-12ml完全培养基，10cm皿加12-15ml，2-3天换液一次。
4. 细胞收货后首次传代建议按1：2传代，后续培养可以视具体细胞生长状态和密度情况决定传代比例；
5. 传代后24h建议观察细胞并换液一次去除死亡细胞；