细胞株的保存与操作方法

1.紫外消毒30min后封闭紫外灯，敞开超净台正常作业状况，用酒精消毒操作者的双手。

2.将所需的培育基，胰酶确保瓶身洁净后放于作业台面内，点燃酒精灯，将培育基和胰酶瓶口用酒精棉球擦洗后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两端。特别是将培育基瓶放于斜架上，瓶口对准酒精灯，且放在间隔酒精灯近的方位，瓶盖置于酒精灯的另一侧。
    
3.将培育瓶瓶口在酒精灯上消毒2-3次，旋开后分别再次消毒瓶口和瓶盖2-3次，盖放于酒精灯右侧后将培育瓶内的培育液悬空倒进污缸，在酒精灯消毒2-3次瓶口，竖直放好。取1ml移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2次，然后再装上枪头招致1.5ml胰酶液，悬空移入培育瓶内。

4.将培育使胰酶浸没整个瓶壁的细胞层，计时约40s，立马竖起对着灯光可调查到细胞与细胞之间有zhen孔样缝隙，并有1-2个细胞掉落，这时为胰酶消化的适机遇。若看到成片的细胞从瓶壁掉落为胰酶消化过度；若看不到zhen孔样缝隙和细胞掉落，则需继续消化，悄然的活络平放培育瓶使胰酶浸没细胞层1s后活络竖起对着灯光调查细胞状况，可重复几回，直至呈现zhen孔样缝隙和1-2个细胞掉落的消化状况。用移液器将胰酶吸净。

5.招致1ml细胞冻存液于培育瓶内，并用移液器招致少量的培育基轻柔的重复冲刷培育瓶壁5-8次，使贴壁细胞完全掉落于培育基内再悄然吹打2-3次，使细胞尽可能处于单个悬浮状况。
6.将1ml含有细胞的冻存液移入新的保种管内，拧紧瓶盖，做好实验符号。

7.将培育基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，停息酒精灯，拾掇实验台面，取出实验试剂及污缸等，封闭超净作业台。

8.将保种管先放于4℃冰箱 30min后拿出放置-20℃冰箱过夜，次日再放于-80℃的冰箱内3-4天，后存放于-196℃的液氮灌内长期保存。

注此进程也可简化因实际操作进程中阅历所得：过程7完毕后将保种管用干脱脂棉包裹后胶带封好直接放于-80℃冰箱内4-5天，即可放于液氮灌保存。但-80℃冰箱也可保存细胞株2-3月。