细胞检测方法的原理是什么？

常见细胞检测方法的原理：

1. 显微镜观察：

• 普通光学显微镜：利用可见光透过细胞样本，通过不同的透镜系统放大细胞的图像，基于细胞和细胞器对光的折射和吸收差异来观察细胞形态和结构。

• 荧光显微镜：细胞中的某些成分（如蛋白质、核酸等）被特定的荧光染料或标记抗体标记后，在特定波长的激发光下发出荧光，从而能观察到这些成分在细胞内的分布。

• 相差显微镜：利用细胞不同部位的折射率和厚度差异，将光程差转变为振幅差，从而能观察到未经染色的活细胞的细微结构。

2. 细胞染色技术：

• 苏木精 - 伊红（H&E）染色：苏木精使细胞核着蓝紫色，伊红使细胞质和细胞外基质着红色，从而清晰显示细胞的整体结构。

• 免疫细胞化学染色：基于抗原 - 抗体特异性结合的原理，使用标记有显色物质（如酶、荧光素）的特异性抗体与细胞内的抗原结合，通过显色反应或荧光来定位和检测目标抗原。

3. 流式细胞术：让单个细胞依次通过激光束，细胞的各种特性（如大小、粒度、荧光标记的抗原表达等）会引起光的散射和荧光发射，通过检测这些信号来分析细胞的多个参数。

4. 细胞培养和集落形成实验：在适宜的培养条件下，细胞会增殖形成集落，通过计数集落的数量来评估细胞的增殖和存活能力。

5. 细胞凋亡检测：

• Annexin V/PI 双染法：Annexin V 能与凋亡早期细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸结合，碘化丙啶（PI）能进入膜通透性改变的晚期凋亡或坏死细胞的细胞核，从而区分不同阶段的凋亡细胞。

• TUNEL 法：检测细胞内 DNA 断裂产生的 3'-OH 末端，从而标记凋亡细胞。

6. 细胞周期分析：使用能与 DNA 结合的荧光染料（如 PI），细胞内 DNA 含量不同，荧光强度不同，从而根据荧光强度分布来确定细胞所处的周期阶段。

7. 基因检测：

• PCR：通过高温变性、低温退火和适温延伸的循环，对特定 DNA 片段进行指数级扩增，然后检测扩增产物。

• RT-PCR：先将 RNA 逆转录为 cDNA，再进行 PCR 扩增和检测，用于分析基因的表达水平。

8. 蛋白质检测：

• Western blot：通过电泳分离细胞中的蛋白质，将其转移到膜上，然后用特异性抗体检测目标蛋白。

• ELISA：基于抗原 - 抗体反应，将抗原或抗体固定在微孔板上，通过显色反应来定量检测目标分子。

9. 细胞活力检测：

• MTT 法：活细胞中的线粒体脱氢酶能将 MTT 还原为不溶性的蓝紫色结晶甲臜，用有机溶剂溶解后通过比色测定吸光度，反映细胞活力。

• CCK-8 法：CCK-8 试剂在活细胞线粒体内脱氢酶作用下产生水溶性的橙黄色甲臜产物，其颜色深浅与细胞活力成正比。

10. 电镜技术：

• 透射电子显微镜：电子束穿透超薄切片，通过电磁透镜聚焦成像，能观察细胞的超微结构。

• 扫描电子显微镜：电子束扫描样品表面产生二次电子，收集二次电子成像，用于观察细胞表面的形貌。