细胞生长曲线实验

细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，是判定细胞活力的重要指标。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。

细胞

D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶

净化工作台 离心机 恒温水浴箱 冰箱 倒置相差显微镜 培养箱 吸管 培养瓶 吸头 枪头 24培养板 胶塞 微量加样枪 红血球计数板

1.  取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液。

2.  计数，精确地将细胞分别接种于21～30个大小一致的培养瓶内或培养孔（以24孔培养板为宜），每瓶或孔细胞总数要求一致，加入培养液的量也要一致。

3.  每天或每隔一天取出3瓶（孔）细胞进行计数，计算均值。培养3～5 d 常要给未计数的细胞换液。

4.  以培养时间为横轴，细胞数为纵轴（对数），描绘在半对数座标纸上，连接成曲线后即成该细胞的生长曲线。

1.  细胞生长曲线虽然最为常用，但有时其反映数值不够精确，可有20～30%的误差，需结合其它指标进行分析。

2.  现在很多实验室利用培养板采用MTT法进行生长曲线测定，较为简便。

1.  标准的细胞生长曲线近似“S”形，一般在传代后第一天细胞数有所减少，再经过几天的潜伏适应期，然后进入对数生长期，达到平台期后生长稳定，最后到达衰老。

2.  在生长曲线上细胞数量增加1倍时间称为细胞倍增时间，可以从曲线上换算出。