发布时间:2020-06-22 16:10 原文链接: 细胞瞬时转染技术

原理:

通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。

应用:

观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失)。

一般流程:

1)细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖。

2)细胞转染(脂质体、电穿孔、FuGENE6等)

3)48小时以后鉴定目的基因的表达情况。

前期准备:

l构建好的外源基因载体,或目的基因基本信息。

l待转染的细胞系(1×106个细胞,可传代,倍增时间小于48小时)以及细胞培养条件的说明。

l若需要检测靶基因的表达,请提供相应抗体。

结果呈现:

构建好的瞬时转染细胞及相关的外源基因表达分析。


相关文章

工业生物技术VS生物制药:基于细胞工厂下的多元发展

工业生物技术和生物制药生产利用生物学使细胞系统成为工厂,生产对人类有价值的分子。这些生物技术过程利用各种宿主生物,并涉及生物燃料、聚合物构件、抗生素和全细胞疗法等应用。除了化学生产外,工业生物技术还可......

我国学者成果入选《细胞》年度最佳研究论文

图开菲尔乳酸菌的传播路线和演化历史。橙色区域代表来自高加索区域的沿海岸线传播的路线;紫色区域代表开氏乳杆菌亚种支系的内陆传播路线,其中3,500年前的新疆菌株位于该支系的基部位置食品发酵是人类历史上最......

我国学者在造血干祖细胞基因组稳定性的机制研究方面取得进展

图胚胎肝细胞通过分泌Fetuin-A蛋白维持造血干祖细胞基因组的稳定性在国家自然科学基金项目(批准号:81920108005、U23A20417、81730007、31872842、91442106)......

成纤维细胞“变身”诱导心肌细胞

该图说明了成纤维细胞生长因子4和抗坏血酸的组合如何激活信号通路,促进诱导心肌细胞的成熟。这种方法有效地将成纤维细胞重新编程为具有改进结构和功能的心肌细胞。图片来源:高丽大学韩国高丽大学研究团队开发了一......

6国科学家共话细胞与基因治疗临床试验及转化

12月13日,在北京市科学技术委员会和中关村科技园区管理委员会的支持下,细胞出版社与清华大学医学院在清华校园联合举办了2024中关村论坛系列活动暨北京国际学术交流季——从实验室到临床:细胞与基因治疗的......

防治心肌纤维化,科学家开发巨噬细胞改造策略

12月5日,记者从良渚实验室获悉,该实验室张进研究员团队与中国科学院动物研究所宋默识博士研究组合作,首次报道靶向嵌合抗原受体巨噬细胞疗法在治疗心肌缺血再灌注导致的组织损伤和纤维化中的应用潜力。相关论文......

含3种关键细胞类型,模拟胎儿胰腺发育的类器官创建

科技日报北京12月4日电(记者张梦然)荷兰胡布雷希特研究所团队开发出一种新型类器官。这种类器官能够模拟人类胎儿胰腺的早期发育过程。这项技术的重大突破是重建了胰腺完整结构,包含三种关键细胞类型——腺泡细......

新技术助力多种肿瘤内细胞丰度的精准预测

11月8日,中国科学院深圳先进技术研究院合成生物学研究所副研究员李雪飞团队与香港浸会大学副教授田亮团队展开合作的最新成果发表于《美国科学院院刊》。合作团队开发了一种基于深度学习与公开单细胞数据集的解卷......

上海市2024年度“科技创新行动计划”细胞与基因治疗专项拟立项项目

根据市科技计划项目管理办法有关规定,现将上海市2024年度“科技创新行动计划”细胞与基因治疗专项拟立项项目予以公示。公示链接:http://svc.stcsm.sh.gov.cn/public/gui......

研究结果表明细胞暴露在缺氧条件下可能存在某种记忆

约翰霍普金斯金梅尔癌症中心的科学家们已经确定了16个基因,乳腺癌细胞在逃离肿瘤的低氧区后,利用这些基因在血液中存活。每一种都是阻止癌症复发的潜在治疗靶点,其中MUC1已经在临床试验中。这项研究于9月2......