结果如下表：
成份 | 细胞主要类型 | 细胞总量×106 | 活性％ | 染色细胞比例％ | 组成％ | ||||
P | E1 | F | L | E | K | ||||
初始样品 | E.F | 133 | 94 | 8 | 98 | 16 | 2 | 75 | 8 |
F1 | F | 14 | 80 | 1 | 88 | 78 | 12 | 9 | / |
F2 | F | 6 | 85 | 1 | 94 | 53 | 6 | 40 | / |
沉淀 | E | 108 | 93 | 1 | 99 | 7 | / | 81 | 11 |
注：①E：endothelal Cell ②初始样品取12 月龄鼠肝，二步不连续梯度分离后取上层
F：Fat-storing Cell
P1：Peroxidase
E1：Esterrase
L：Lymphocytes
K：Kupffer
例10 用离心浮选法从人血中纯化单核白细胞
l 离心浮选设备同上述
l 浮选前、后处理需要低速低温离心机50ml 甩平转头
l 浮选用液：含25mM 葡萄糖及1％（W/V）BSA 的磷酸缓冲液
l 酯酶（Esterrase）染色所需设备及试剂
l 肝素化（利用肝素增加血液凝固时间）人血（50ml）
l 梯度材料Ficoll-Pague (Pharmacia-Biosystems)
Lymphoprep (Nycomed Pharma，A/S)
l 磷酸盐缓冲液（PBS）（50mM，PH7.4）
分离步骤：
i. | 用例（1） 的方法从50ml 血样中纯化单核细胞，从分界面收获细胞液， 加浮选 |
液后容积为5ml 。 | |
ii. | 安装离心浮选系统，用浮选液充满浮选离心室，设置5℃。 |
iii. | 预置转速2,030rpm, 设定流量4.7ml/min |
iv. | 加入样品（1×108 个细胞）， 离心，分九次收集，每次50ml 分别用流量4.7，8.0， |
10.0，11.0，12.0，12.7，13.5，14.5，16ml/min 收集。 | |
v. | 收集后的细胞样品分别用450g×10 分收集沉淀。 |
vi. | 将以上沉淀分别用3ml 浮选液稀释成悬液 |
vii. | Esterrase 染色后计数 |
结果如下表： |
成份 | 流量（ml/min） | 细胞数量（×106） | 酯酶染色 | |
负染（％） | 正染（％） | |||
原液 | / | 104 | 85.6 | 14.4 |
1 | 4.7 | 0 | / | / |
2 | 8.0 | 3 | 100 | 0 |
3 | 10.0 | 17.8 | 99.7 | 0.3 |
4 | 11.0 | 25.0 | 99.3 | 0.7 |
5 | 12.0 | 25.0 | 98.0 | 2.0 |
6 | 12.7 | 10.8 | 95.2 | 4.8 |
7 | 13.5 | 1.2 | 95.3 | 4.7 |
8 | 14.5 | 0.8 | 84.5 | 15.5 |
9 | 16 | 2.0 | 58.7 | 41.3 |
沉淀 | / | 10.0 | 28.4 | 71.6 |
参考文献：
1 ：“Bruwer，A“等“Centrifugal Separations of mammalian calls”in“Centrifugation-a Practical
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2：“B∮yun , A.”“Scand. J. Clin. Inrest. Vol. 21 (Suppl. 97) P. 77”
3：Wisse，E.等“Progress in liver diseases”Vol：Ⅵ P153，Grune and Stratton，Inc.1979)
4：“B∮yun , A. 等” “Iodinated density gradient media：a practical approach, Oxford Uni.IRL Press 1984
5：Tulp.A. 等 Anal.Biochem.Vol.117 P354 (1981)
6：Brouwer,A 等人“Sinusoidal liver cells” P509，Elsevier Biomedical press .Amsterdam, 1982
7：Pertoft, H 等“Cell Separation：methods and selected applications”Vol 1，P41 Academic press. New York 1982
8：Remenyik，C.J. 等Arch. Biochem. Biophys.Vol:201 P500
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10：Knook, D. L. 等“Exp. Cell Res. Vol:99, P444
11：MacGlashan, D.W 等“Cell Separation：Methods and Selected application ”Vol：1 P301 Academic Press. New York 1982
12：Wells, J.R. 同上书P169
13：Bezooijen C.F.A 等“Pharmacological morphological and Phisiological Aspects of liver aging” Vol:1 P115(1984)
14：Knock，D,L 等“Exp 。Cell Res. Vol:139 P468 (1982)