细胞裂解液对蛋白质定量方法的影响

[摘　要]　目的: 观察不同细胞裂解液对B radfo rd 法和b icinchon in ic acid (BCA ) 法的影响, 以确定适合蛋白质组学研究中细胞全蛋白含量的定量方法。方法: 采用B radfo rd 法和BCA 法测定牛血清白蛋白(bovine serum album in,BSA ) 样品溶液, 样品BSA 溶液分别由双蒸水和不同裂解液(荧光差异双向凝胶电泳裂解液、三种传统双向凝胶电泳裂解液) 配制; 然后, 采用这两种方法测定上述裂解液所提取的细胞全蛋白样品; 采用Bradfo rd 法定量反复冻融、不同比色杯和不同时期标准曲线下的样品。结果: 各细胞裂解液对B radfo rd 法均有显著性影响, 使所定量的BSA 浓度普遍偏高1. 2 至2倍, 但定量值可随着加样浓度的增加而增加(r= 0. 989～ 0. 996, P < 0. 05) ; 各裂解液对BCA 法也均有显著性的干扰, 多数定量结果超出仪器读数范围; 对于同批全蛋白溶液样品,BCA 法的定量结果与B radfo rd 法相比可有千倍差异; 反复冻融后蛋白浓度变化统计学上无显著性差异, 但有下降趋势, 不同比色杯和不同时期标准曲线对B radfo rd 法无显著影响。结论:B radfo rd 法是蛋白质组学中细胞全蛋白定量的较适方法, 但需根据具体实验进行优化。