细菌中制备基因组DNA实验

细菌

TE 氯化铯 溴化乙锭 NaCl 乙醇 CTAB

离心机 摇床

1.  培养5 ml 的细菌培养物至饱和状态，取1.5 ml 的培养物离心2 min。

2.  沉淀物加入567 ul 的TE缓冲液，用吸管反复吹打使之重悬。

3.  加入30 ul 10%的SDS和3 ℃ 20 mg/ml蛋白酶K，混匀，于37℃温育1 h。

4.  加入100 ul 5 mol/l NaCl充分混匀，再加入80 ul CTAB/NaCl溶液，混匀，于65℃温育10 min。

5.  加入等体积的氯仿/异戊醇，混匀，离心4~5 min将上清液转人一个新管中，如果难以移出上清，先用牙签除去界面物质。

6.  加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，混匀，离心5 min，将上清液转入一只新管中。

7.  加入0.6体积异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，用一个封口的巴斯德管将沉淀转移至1 ml 的70%乙醇中洗涤。

8.  离心5 min，弃上清，用冻干机稍加干燥，重溶于的下100 ul  TE缓冲液，每次酶切反应用10~15 μl。