细菌肥达反应实验

实验方法原理 试管凝集反应是一种半定量的凝集反应。常用已知抗原测定受检血清中有无相应抗体及其含量，以辅助临床诊断或供流行病学调查分析。

实验材料 伤寒杆菌“H”菌液伤寒杆菌“O” 菌液

试剂、试剂盒 诊断血清生理盐水

仪器、耗材 小试管吸管

实验步骤

1． 取洁净小试管14只分两排排列于试管架上，每排7只依次用蜡笔注明号码，于每管中分别加入0.5 ml生理盐水。

2． 在第1排第1管中加入1∶10稀释伤寒"H"血清0.5 ml，使血清与盐水充分混合，而后吸出0.5 ml注入第2管，同样予以混匀后吸出0.5  ml注入第3管。以此类推，稀释到第6管，自第6管吸出0.5 ml弃去。此时，自第1管至第6管的血清稀释倍数为1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640。第7管不加血清作为对照。

3． 同法用吸管吸取1∶10稀释伤寒杆菌"O"血清加入第2排第1管，并依次如上法予以稀释。

4． 用移液管吸取伤寒杆菌"H"菌液，加入第1排各管中每管0.5 ml，此时血清稀释倍数又增加了一倍。

5． 同法于第2排各管中加入伤寒"O"菌液0.5 ml。

6． 将各管振荡混匀，放37℃水浴箱中2~4h或37℃孵育箱中过夜，次日取出观察结果。

注意事项

观察切勿摇动试管，以免凝集块分散

其他

1． 对照管无凝集现象，管内液体仍呈混浊状态。但如放置时间较长，细菌堆于管底成小圆点状，为阴性反应。

2． 试验管与对照相比可见管底有不同大小的圆片状边缘不整齐的凝集物，上清则澄清透明或不同程度混浊。凝集的强弱可用“+”号表示如下：

“++++”凝集很强，管内液体完全澄清，凝集块完全沉于管底；

“+++”凝集强，管内液体不完全澄清稍有轻度混浊，凝集块沉于管底；

“++”凝集中等强度，液体半澄清，凝集块沉于管底；

“+”凝集弱，管内液体混浊，少量凝集块沉于管底；

“－”不凝集，管内液体和对照管同样混浊，无凝集块。

3． 记录观察的结果并判断凝集效价。通常以能产生明显凝集（++）的血清大于稀释倍数作为该血清的凝集效价。如血清的最低稀释度（即第1管1:40）仍无凝集应报告为低于1:40。如血清的最高稀释度（即第6管1:1280）仍显完全凝集现象，应报该血清效价高于1:1280。