Western转膜步骤
下面的步骤适用于通过Xcell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果，用户的优化是必要的。
I. 所需材料： • Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）
• 电泳后的迷你胶（mini-gel）（最大的尺寸9cm*9cm）
• 预先切割好的印记膜：
硝酸纤维素（Cat. no. LC2000或LC2001），
PVDF（Cat. No. LC2002）或Nylon+（Cat. No. LC2003）
• 转印垫（Cat. No. EI9052）
• 甲醇
• 去离子水
• 转移缓冲液（配方见下文）
• 用于平衡膜，滤纸和转移垫的浅盘
II. 规格：
转印槽尺寸： 14.5cm x 14cm x 11cm
Blot Module容积：约200ml
下缓冲液槽容积：600ml
Blot尺寸： 约9cm*9cm
注意：在以下步骤中，应该始终使用手套以避免凝胶和膜的污染，并防止接触电泳和电转过程中常用的刺激物。
Ⅲ 材料制备
a) 转膜缓冲液- 请注意对大多数转膜我们推荐使用强度减半的Towbin缓冲液，其中含有20％的甲醇。使用Xcell Ⅱ转印系统进行成功的转膜，0.5Xtowbin缓冲液就可以提供足够的离子强度，而不产生过多的热量。这种缓冲液可能不适合其它的转印系统，反过来也是这样。一升的转膜缓冲液制备方法如下（ 含20％甲醇的0.5X Towbin）
使用我们的Tris-Glycine转膜缓冲液： 去离子水 760 ml
转膜缓冲液（Cat. No. LC3675） 40 ml
(25×未稀释液)
甲醇 200 ml
总体积 1000 ml
自己制备Tris-Glycine转膜缓冲液：
Tris 碱 (12mM) 1.45 g
甘氨酸 (96mM) 7.2 g
甲醇（20％终浓度） 200 ml
去离子水 加至1L
总体积 1L
请参看invitrogen目录648页制备NuPAGE®转膜缓冲液。
b) 制备转印垫－ 用大约700ml的转印缓冲液浸泡转印垫至饱和，浸泡在缓冲液中时注意挤压转印垫去除气泡，这一步骤是必需的，因为不去除气泡可能会阻碍生物分子的转印。
c) 制备转印膜和滤纸－ 将选择的转印膜和滤纸按凝胶尺寸裁好或使用预先裁好的膜/滤纸复合层。
• PVDF膜－预先将PVDF膜在甲醇，乙醇或异丙醇中湿润。在去离子水中稍事润洗后，将膜放入含50-100ml转膜缓冲液的浅盘中放置数分钟。