绿豆根形成法测定生长素类物质的浓度或效价

实验方法原理:生长素即可促进胚芽鞘与茎的伸长及果实的发育，也可促进根的形成。在一定浓度范围内，根形成的数目随浓度成正比地增加，浓度过高则起抑制作用。用标准生长素溶液来作对比时，就可测出某一类似生长素的效价或某一提取液中内源生长素的浓度。

实验材料:绿豆种子 

试剂、试剂盒、IAA溶液

仪器、耗材：培养室、温箱、搪瓷盘、烧杯、刀片、刻度吸管、培养皿、镊子、石英砂                   

实验步骤:一、材料和设备

绿豆种子

培养室（700－750米烛光），温箱，搪瓷盘，烧杯，刀片，刻度吸管，培养皿，镊子，石英砂。

50pp M IAA溶液：称取IAA5毫克，溶于水中（微微加热），在100  ml 容量瓶中定容至刻度。摇匀，贮冰箱中待用。

二、实验步骤

（1）绿豆幼苗的培养：将绿豆种子用约80度热水浸种，当水冷却到室温后，继续浸泡两小时，使种子充分吸胀。然后将种子放在垫有湿润滤纸的培养皿中，于25℃恒温箱内使其萌发，24小时后，挑选萌发整齐的绿豆幼苗，播种在湿润的石英砂中，放在25℃左右，光照为700－750米烛光下培养到7－10天时，绿豆幼苗已具有一对展开的真叶与三片复叶的芽，就可供制备切段以作试验之用。

（2）幼苗切段的制备：选生长整齐的绿豆幼苗，用刀片由幼苗子叶节下3厘米处切去根系，如果子叶没有脱落则将子叶也去掉。此时切段带有3厘米长的下胚轴，第一对真叶及复叶，芽（见图9）。试验前将制备好的切段浸泡在水中以免切口风干。

（3）取50毫升烧杯6只，用玻璃铅笔编号，于第一只烧杯中倒入50pp M  IAA溶液50  ml 吸出5  ml 移入第2号杯中，再于2号杯中加入45  ml 蒸馏水，用玻璃棒搅匀，即成5pp M 的溶液，如此逐级释放直到第5号杯中配成005pp M 吲哚乙酸，并从中吸出5cm 3弃去为止，于第6号杯中加45  ml 蒸馏水作对照，各杯均在杯外壁划线记下液面高度，各杯溶液溶度如下：每一烧杯中插入准备好的绿豆苗切段5或10段，将子叶节浸入液面以下。每24小时加一次蒸馏水使保持原来的溶液体积。7天后，计算每个切段所长的根数。可以看到，根的数目随一定范围内生长素浓度的增加而增加。

烧杯号123456

IAA （pp M ）5050.50.050.0050.00

图5生长素生物鉴定用的绿豆切段
1．复叶  2.真叶    3.上胚轴  4.下胚轴

（4）标准曲线的绘制：以生长素溶液浓度的对数作横坐标，以生长素溶液及蒸馏水中发根数之比值（L/L）。作纵坐标，绘制出标准曲线。

（5）末知样品浓度或效价的测定：若有末知浓度的生长素提取液或末知效价的类似生长素溶液，需要进行测定时，均可依上法求L/L，然后和标准曲线比较，即可求得浓度或效价。