聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色实验

甘油 染色液 高甲醇脱色液 标准 (低甲醇) 脱色液

Whatman 1 号和 Whatman 3 MM 滤纸 待染色的聚丙烯酰胺凝胶 干胶器

材料与设备

待染色的聚丙烯酰胺凝胶

甘油 (4%;v/v)

干胶器

Whatman 1 号和 Whatman 3 MM 滤纸

溶液

染色液

高甲醇脱色液

标准 (低甲醇) 脱色液

操作程序

1) 凝胶置约 100 ml 染色液中染色。室温下，在平台摇床或旋转平台上孵育至少 20 min。

2) 弃去染色液（小心，它很容易溅出），用约 100 ml 高甲醇脱色液洗胶板。

3) 于 100~200 ml 高甲醇脱色液中脱色。当脱色液的颜色与胶的颜色一样深时更换脱色液，约需 2?3 h。脱色液一般要换 3?4 次，通常至大部分蓝色褪尽为止。

4) 凝胶置约 100 ml 标准（低甲醇）脱色液中 4?6 h 或过夜，使之完全脱色。至此，胶板的本底应基本清洁。胶板在脱色液中时间过长（数日至数周），会使染上色的蛋白质带的顔色变浅。脱色后，胶板应保存于室温、蒸馏水中。

5) 凝胶在甘油（4%;v/v) 水溶液中平衡至少 60 min(乙酸往往会使干胶器和真空泵不能正常运转，甘油有助于使胶板在千燥时不干裂）。至此，胶板可长时间地保存于 4°C 或用干胶器干燥。

6) 干胶方法如下。先取两张矩形的玻璃纸（大小比胶板略大)，在水中浸泡数分钟使之含水。将胶置于两张玻璃纸之间，确保在胶板与玻璃纸之间无气泡。然后，按下述顺序（自上至下放置于干胶器中：塑料包装纸（如 Saran 包装纸、玻璃纸、待干燥的聚丙烯酰胺凝胶、玻璃纸、Whatman 3 MM 滤纸、Whatman 3 MM 滤纸。确保在胶板与干胶器之间无塑料包装纸。在干胶板器中加热干燥约 lh。

注：如需照相，最好在胶板干燥之前进行。