实验概要
本实验用低浓度PEG将IC沉淀,沉淀物中加入补体,以溶血反应检测了补体消耗率。
主要试剂
1. 热聚合人ISC:制备方法同PEG沉淀试验。
2. 硼酸缓冲盐水(朋S) 含硼酸0.1mol/L,硼砂25mmol/L,NaCl 75mmol/L,调整为pH8.4
3. PEG 用BBS将PEG配成12.5%和2.5%。
4. 0.2mol/L EDTA-Na2用1mol/L NaOH调整为pH7.2。
5. 5XVB保存液 NaCl 85.0g,巴比妥5.75g,巴比妥钠3.75g,加蒸馏水约1500ml,加热溶解后补加蒸馏水至2000mL。
6. GVB2加5×VB保存液400mL,0.03mol/LCaCl210mL,0.1mol/L MgCl2 10mL,2%明胶l00mL,补加蒸馏水至2000mL,pH7.5。
7. 致敏绵羊红细胞(SRBC) 2%SRBC悬液加等量1:1 000溶血素,37℃水浴l0min,用GVB2加将致敏SRBC配成1.5×108/mL。
8. 人补体与健康人对照血清选用总补体溶血活性正常的健康人血清数份混合,作为补体来源。自3名健康人各取血清50mL,各按lmLl份分装,-70℃冻存,每次取3份血清作为对照。
实验步骤
1. 待测血清0.3mL,加0.2mol/L EDTA-Na2和BBS各50uL,充分混匀后加入12。5%PEG 0.1mL,混匀,置4℃ 90min。
2. 4℃ 1700r/min离心10min,弃上清,沉淀物用2.5%PEG洗1次,用玻璃棒搅拌,再于4℃ 1700r/min离心15min,弃上清,管口余水用滤纸吸除。
3. 加入37℃ 30min预温的GV铲’30uL,待沉淀溶解后,加入混合人补体10uL(用微量加样器准确加入)。混匀,置37℃,使补体与IC充分反应。
4. 加入1.5X108/mL致敏SRBCl.0mL,37℃水浴振荡60min。取出后立即加人4℃冷生理盐水6.5mL,离心,吸取上清液于414mn波长测吸光度。
5. 每批试验以热聚合人IgG 5、10、25、50、l00ug/mL制备标准曲线。
分析测试百科网讯2020年9月15日,2020年中国质谱学会质谱网络研讨会(2020CMSS)进行到第二天,由北京生命科学研究所董梦秋研究员、中国科学院生态环境研究中心汪海林研究员、同济大学田志新教授......
英国《自然》旗下新刊《自然·生物医学工程》近日在线发表的一篇论文,描述了一种由全新方法合成的不含抗原的糖尿病药物,不但能大幅延长药物在小鼠体内的作用时间,还消除了患者体内有预存抗体导致的药物副作用。在......
2013年12月2日消息,欧洲化学品管理局(ECHA)发布了一份为统一分类及标签(harmonisedclassificationandlabelling,CLH)的档案文件准备的指导草案的修订版,并......
应用PEG化干扰素成功实施的这一病例,具有一定的临床意义 其实,不单单在电视剧中,现实生活中也总会不时发生着一些活供体移植的感人故事。发生在日本的一例活体肝移植病例,在感人的成分之外,医学专......
摘要:简述了蛋白质PEG修饰的研究概况,涉及PEG化学修饰反应的类型和影响因素,PEG修饰蛋白的性质、应用及局限性。......