发布时间:2022-11-11 12:58 原文链接: 聚合酶链反应的过程

标准的PCR过程分为三步:

DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA

退火:(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。

延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸,合成与模板互补的DNA链。

每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。如图所示:现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。