胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原的评价

【 摘要 】　目的　对4种胶体金免疫层析测定(GICA)试条检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的性能、结果等技术参数进行评价，为各实验室的选用提供参考。方法　采用GICA法和酶免疫(EIA)法对定值的HBsAg样品和2 158份全血或血清标本同时测定，并结合有关物理现象作观察，对4种GICA试条的敏感性、特异性、试条渗透性、固相膜均匀性等结果进行评价。结果　4种GICA试条对HBsAg的最小检出量为1～5 ng/ml；与EIA法比较，检出率为95.6%～98.7%，一般不出现假阳性，未发现前带反应；检测所需时间5～30分钟，但试剂成本为EIA法的4～5倍。结论　GICA适用于急诊检验，便于献血员现场采血前的筛选；其敏感性低于EIA法，成本高；单独用于献血员筛选并不可靠，必须与EIA法并用，实行双检。

【 关键词 】　免疫酶技术　　肝炎表面抗原，乙型　　胶体金

Gold immunochromatography for HBsAg detection
ZENG Zhangxin, LIU Wenxing, ZHU Zhongyong, et al.
PLA Center for Laboratory Medicine, Fuzhou General Hospital, Fuzhou 350025

【 Abstract 】　 Objectives To evaluate the quality and performance of 4 sources of gold immunochromatography assay (GICA) strips for HBsAg detection and to provide data for various laboratories in the selection of HBsAg assay methods. Methods Several known sera and 2158 unknown sera were tested with both GICA strips and EIA. The sensitivity, specificity and physical properties of the strips were assessed. Results The minimal detection limits of the 4 sources of GICA strips were 1-5 ng/ml, with detection rates varying from 95.6 to 98.7%, as compared with EIA. No false positives and pre-band phenomena were found. GICA needed 5 to 30 min to complete. It costed 4 or 5 times as much as EIA. Conclusions GICA is fit for emergency and rapid screening of blood donors. It is less sensitive than EIA, and costs more. In blood donor screening, GICA should be combined with EIA, since screening only by GICA may not be reliable.

【 Key words 】　 Immunoenzymetechniques Hepatitis B surface antigens Gold colloid

　　胶体金免疫层析测定(简称GICA)具有简便、快速、特异性高、试剂稳定的优点，已在临床免疫检验中广泛应用 ［1，2］ 。目前越来越多的实验室采用GICA试条测定乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。由于各厂家采用的固相微孔膜、包被和金标记抗体以及成品试条制备工艺有所不同，以致各种GICA试条对HBsAg检测性能和结果出现差异。 我们就已在国内使用的4种品牌8个批号的GICA试条对HBsAg检测性能及有关技术参数进行了试验比较和评价。

材料和方法

一、材料

1、检测HBsAg的GICA试条：
　　4种品牌、8个批号，分别称为试条1(批号P006和6926，规格5.5 mm)；试条2(批号980908，规格3.3 mm)；试条3(批号9811059和98120711，规格3.3 mm)；试条4(批号8092801、8122901和9022001，规格3.3 mm)。

2、测定HBsAg的EIA试剂盒：
　　 共4种，分别为上海实业科华生物技术有限公司，厦门新创科技有限公司，上海荣盛生物技术有限公司和深圳华元医药生物工程公司产品。

3、HBsAg定值质控样品：购于北京全国临床检验中心(批号9901，分别为1、2、5 ng/ml)。

4、酶标仪：美国Bio-Rad450型。

5、标本来源：采集无偿献血者和来本院就诊患者的末梢全血1 190份、血清968份。

二、方法

1、敏感性试验：
　　对定值为1 ng、2 ng、5 ng/ml的3种HBsAg质控样品和2 158份受检全血或血清标本，采用4种GICA试条和4种酶免疫(EIA)试剂盒同时测定。GICA法测定血清HBsAg是将各试条的加样区直接浸入血清中30秒，取出后平放静置。全血HBsAg测定则采用受检者末梢全血3滴直接滴加于每一试条加样区，待渗透约1分钟后，插入含0.3 ml生理盐水的小试管中静置。两种测定均在30分钟内间断观察并记录A值。定值样品测定与血清HBsAg测定相同。

2、特异性试验：
　　 收集80份经EIA测定HBsAg为阴性的血清标本，分别从4种GICA试条中各任意抽取20条进行复检。另收集6份EIA初始测定HBsAg出现前带反应(实际为抗原过量而呈弱阳性，A值0.216～0.328)，但GICA测定为强阳性的血清标本，经稀释后再用EIA复检，以此2种试验观察GICA测定HBsAg的特异性。

3、GICA试条的渗透速度和均一性试验：
　　 从每一种品牌的不同批号中任意抽取10条GICA试条，分别浸入同一份混合血清中，以试条加样区接触血清开始计时，30秒后取出，平放静置观察，待血清渗透至对照线出现肉眼可见颜色时，记录时间，并以各自10条的平均时间作为渗透速度的指标。均一性观察是在测定受检标本时，连带观察100条每一品牌或不同批号GICA试条，以标本在滤膜上渗透时出现明显的未浸湿的斑块，或浸液后15分钟以上不能到达对照线的试条判为不均一，计算各自百分率作为试条的均一性指标。

4、其他相关性试验与观察：
(1)对GICA试条用于全血与血清标本测定HBsAg的敏感性做比较试验；
(2)观察试条保存条件对测定结果的影响；
(3)对GICA和EIA测定HBsAg时，每份所需试剂成本和检测时间分别进行测算并比较。

结果

1、采用4种GICA试条和4种EIA试剂盒，对3种HBsAg定值的质控品和2 158份受检血标本测定HBsAg的结果见表1，2。

2、EIA法测定80份HBsAg阴性的血清标本，经4种GICA复检结果均为阴性。6份EIA初始测定HBsAg出现前带反应呈弱阳性的血清标本(A值0.216～0.382)，经稀释后重测均为强阳性(A值1.169～>2.500)，其中1份作倍比稀释最高至1∶25 600，其A值为0.240，与定值样品比较，推算该份

表1 　4种GICA和EIA对HBsAg定值样品测定结果的比较

*为定性试验结果阴性，其余为阳性

表2 　GICA检测全血或血清HBsAg阴性标本经EIA复检的结果比较

血清HBsAg浓度约为51 200 ng/ml，而GICA测定都显强阳性。

3、GICA试条的渗透速度和均一性试验结果见表3。

表3 　4种GICA试条渗透速度与均一性试验结果比较

4、用GICA试条4测定1 139份献血员的全血HBsAg阴性标本，采血后收集血清经EIA全部复检，检出的47份阳性血清，再用同批号GICA试条重新测定，检出阳性6份。另外试验观察到密封包装开封后的试条在4℃存放时，由于受潮，在使用此种试条检测时，对照线和阳性反应色带均变弱，甚至不出现，使测定敏感度下降或失效。

5、经测算GICA试条每份成本费为4.0～6.2元，测定用时间5～30分钟；每份EIA试剂的成本费1.0～1.2元，测定所需时间1.5～2小时。

讨论

　　GICA检测HBsAg具有简便、快速、可单份操作的优点 ［2，3］ ，能满足就诊者急诊检验的需要，尤其为无偿献血者现场采血前检测HBsAg提供了便利条件。因此，许多实验室采用GICA法测定HBsAg的兴趣与需求不断增加。目前，国内一些试剂厂商纷纷推出或代理国内外商品化的GICA试条，但各生产厂家制备试条的固相微孔膜、包被方法和金标记用抗体以及工艺技术上存在差异，使HBsAg的测定结果受到一定影响。就此，我们选用国内代理商的4种GICA先后8个批号试条对测定HBsAg的性能、结果等技术性参数作了比较及评价，为实验室的选用提供参考。

　　选择了3种低定值的HBsAg质控样品和2 158份待检测HBsAg的全血或血清标本，先后采用4种GICA试条和4种EIA试剂盒对每份样本经2种方法同时测定并比较。GICA对HBsAg的最小检出量是1～5 ng/ml，EIA的最小检出量均≤1 ng/ml(表2)；GICA对HBsAg的检出率为EIA的95.6%～98.7%，平均为96.2%(表2)。结果表明GICA法的敏感性低于EIA法，与文献报道大致相同 ［2，3］ 。与EIA比较，GICA检测HBsAg一般不出现假阳性；对抗原量过大的标本未发现前带反应。表明GICA检测HBsAg具有高特异性。

　　GICA检测HBsAg虽然适用于单份标本测定和急诊检验，对现场采血前献血员的筛选有其实用价值，但由于测定的敏感度低于EIA法，加上其成本是EIA法的4～5倍，使GICA的应用将受到一定的限制。为了确保临床用血的安全，经GICA初筛测定为HBsAg阴性的供血，仍需用EIA进行复检。如时间允许，患者就诊和献血员筛选应首选EIA检测HBsAg，可提高检出率，并大大降低检测费用。

　　从4种GICA试条的渗透速度和发生不均匀的比率结果可以看出，试条测定HBsAg的敏感性与两者存在一定的相关性。对于不同品牌或同一品牌不同批号试条的敏感性、渗透速度和微孔膜不均一性的差异，可能与各厂家所用的材料和制备工艺技术有关。GICA测定全血与血清HBsAg的结果表明，血清比全血的检出率要高，必要时可选用血清测定。另外，选用敏感性高，渗透速度快，微孔膜均一性好，且密封、干燥保存的高质量试条，可保证HBsAg检测结果的准确性。