胶体金标记的全定量免疫层析技术的原理

从定性、半定量向全定量是即时检验（POCT）技术发展的一个趋势。全定量的POCT检测技术有多种原理。本文主要介绍胶体金标记的全定量免疫层析技术的原理。

一、胶体金标记的全定量免疫层析POCT试剂装置结构示意图及作用

1、    吸收垫：吸收多余液体。

2、    PVC底板：提供试剂封装外壳。

3、    C1、C2：标准质控区。羊抗鼠抗体结合于硝酸纤维膜上。

4、    T：检测区。鼠源性单克隆二抗。

5、    硝酸纤维素膜：提供抗原抗体反应的固相载体。

6、    胶体金垫：含胶体金标记的鼠源性单克隆抗体。

7、    样品吸收垫：吸收样品液体。

二、原理

该方法的免疫学原理是一个双抗体夹心法。

样品加入样品吸收垫，样品中的液体首先溶解胶体金垫中含有的胶体金标记的鼠源性单克隆抗体。其次样品中待测抗原与胶体金颗粒标记的鼠源性单克隆抗体结合，形成抗原-抗体*胶体金复合物，并靠毛细作用向检测线移动。在硝酸纤维薄膜的检测线上固定有另一鼠源性单克隆二抗。当样品层析至检测线时，可以进一步形成抗体-抗原-抗体*胶体金双抗体夹心复合物，并在检测线上聚积显现出一条可见的显色反应。无显色反应则表示样品中无抗原存在。而胶体金的量反应了待测抗原的量。从加样垫中泳动过来的过量胶体金标记的单克隆抗体是鼠源性的，无论携带抗原与否，均可被固定于标准的羊抗鼠抗体所捕获，形成显色反应，这种显色反应，既代表了整个反应体系是正确的，同时C1、C2区的显色反应的深浅，与检测区中被测抗原的量呈对应关系。胶体金颗粒在特定波长下，对光的吸收和散射与胶体金颗粒的量相关，通过光电感应器检测胶体金颗粒对光的吸收和散射，从而获得待测抗原的量。

三、讨论

    全定量是POCT的发展趋势，采用两点定标法是全定量的一个重要标志，只有两点定标才有可能实现真正的全定量。