脂肪酶的测定实验

实验方法原理

实验材料 酶样品

试剂、试剂盒 氯化钠氯化钙牛血清蛋白牛磺胆酸钠橄榄油-阿拉伯树胶乳胶脂肪酶NaOH

仪器、耗材 自动滴定器

实验步骤

实验混合物：

5 ml 橄榄油-阿拉伯树胶乳胶

5 ml H2O

2 m l 3.0 mol/L NaCl

1 ml 0.075 mol/L 氯化钙

2 ml 0.5％BSA（酵母脂肪酶）或 0.027 mol/L 牛磺胆酸钠（猪脂肪酶）

15 ml，调至 pH 8.0

空白对照：记录约 3 min 内，每次自动滴定器加入的滴定标准液的量。

样品：在实验混合物中加入合适量的稀释酶（根据活性），并记录约 5 min 内，每次自动滴定器加入的滴定标准液的量。

计算：

25℃、pH 8.0 时，从乳化的橄榄油中，每分钟一个单位释放出 1 umol 脂肪酸。

注意事项

其他

试剂：

3.0 mol/L 氯化钠（NaCl，Mr＝58.4；17.5 g 溶于 100 ml 水中）

0.075 mol/L 氯化钙（CaCl2·6H2O；Mr＝219.1；1.62 g 溶于 100 ml 水中）

0.005 mol/L 氯化钙（稀释 0.075 mol/L 氯化钙溶液 15 倍）。

0.5％ 牛血清蛋白（BSA，酵母脂肪酶）

0.027 mol/L 牛磺胆酸钠（猪脂肪酶，Mr＝537.7；1.45 g 溶于 100 ml 水中）

橄榄油-阿拉伯树胶乳胶。溶解 16.5 g 阿拉伯树胶于 130 ml 水中，补充至 165 ml。加入 20 ml 橄榄油和 15 g 碎冰，低速搅拌直到乳浊液形成。用玻璃绒过滤。

脂肪酶（储存溶液：每毫升 5 mmol/L 氯化钙溶解 1 mg，实验中再稀释于 5 mmol/L 氯化钙中）

0.01 mol/L NaOH 标准溶液作为滴定剂，加入自动滴定器的滴管中。