脂肪酸合酶的测定实验

酰基 CoA：丙二酰 CoA C-转酰基酶（脱羧、异丁基还原、烯酰还原与硫酯水解）。

乙酰-CoA＋n 丙二酰-CoA＋2n NADPH＋2n H^＋ → CH₃-（CH₂-CH₂）n-CO-CoA＋n CoA＋n CO₂＋2n NADP＋＋n H₂O

式中，n＝6～8。

脂肪酸合酶

磷酸钾EDTA二硫赤藓糖醇乙酰-CoA丙二酰 CoANADPHBSA

分光光度计

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.96 ml 实验混合物

0.02 ml 酶样品

25℃ 时，观察 3～4 min 于 340 nm 处吸收值降低

开始反应需加入 0.02 ml 0.007 mol/L 丙二酰-CoA 0.14 mmol/L

25℃ 时，于 340 nm 处吸收值降低，ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

试剂：

0.1 mol/L 磷酸钾，pH 6.5

0.1 mol/L EDTA（Mr＝292.2；292 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L 二硫赤藓糖醇（DTE，Mr＝154.2 或二硫苏糖醇，DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L 乙酰-CoA（Li₃ 盐，Mr＝827.4；8.3 mg/ml）

0.007 mol/L 丙二酰 CoA（Mr＝877.3，Li₄ 盐；6.1 mg/ml）

0.01 mol/L NADPH（Mr＝833.4，Na₄ 盐，83 mg 溶于 10 ml 水中）

2.4％ BSA（240 mg 溶于 10 ml 水中）