脂质体介导的真核细胞转染实验

哺乳动物细胞

质粒DNA 完全培养基 氯化铯 DMEM

培养皿 培养箱 聚苯乙烯管

1.  按5×10⁵细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞，在37℃ 5%CO₂培养箱中 培养过夜，直至细胞80%汇片。（如果用100 mm 培养皿代替六孔扳，则培养细胞至80%汇片，将所有数量扩大8倍）

2.  在聚苯乙烯管中配制DNA/脂质体复合物如下：稀释质粒DNA至1 ml DMEM-SF中，在旋涡混合器上振荡1 s 然后加入脂质体悬液、再次旋起混匀。在室温下温育5~ 10 min，使DNA与阳离子脂质体结合。

3.  吸去DMEM-SF培养液，用1 ml 的完全DMEM-SF洗1次，吸去DMEM-SF。对毎个35 mm 孔中，直接在细胞上加1 ml DNA/脂质体复合物。在37℃培养箱中温育3~5 h。

4.  往每孔细抱中加入1 ml 的DMEM-20完全培养液，在37℃培养箱中继续温育24~48 h。

5.  吸去完全DMEM/DNA/脂质体复合物，毎孔加入2 ml 新的DMEM-10完全培养液，继续搵育24~48 h。

6.  收集细胞：用细胞刮于刮下细胞，或胰蛋白酶消化或冻融裂解细胞。 进行适当的表达分析。