自动生化分析仪参数设置

了解生化分析仪基本参数的原理，有利于仪器、试剂的正确使用，有助于正确分析和处理测定数据。生化分析仪根据自动化程度分半自动和全自动，从目前试剂盒供应情况来看，主要的测定方法为：终点法(包括一点终点法和两点终点法)、速率法(连续检测法)、速率两点法(两点法)，后两种统称动力学法。

方法类型可根据试剂盒要求或反应原理来设置。对于半自动生化分析仪终点法只是一点终点法，全自动生化仪单试剂选择一点终点法，而双试剂选择两点终点法。大多数酶学测定使用速率法，尿素氮、肌酐测定等用两点法。

1、一点法

又称为终点法。指加入标本和试剂后，当反应达到一定阶段时（或终点）测定吸光度值计算待测物质浓度的方法。主要用于总蛋白、白蛋白、血糖、甘油三酯和胆固醇等项目测定。

2、二点法

在反应过程中测定两个时间点的吸光度（A1、A2），利用二者的差值（A1-A2）计算待测物质浓度的方法。二点法又称为二点终点法，使用双试剂进行分析时多彩二点法，加入标本和第一试剂测定一次吸光度，加入第二试剂（启动试剂）待反应完成时测定另一个吸光度，两者的差值可消除标本内源性物质的干扰。主要用于总胆红素、直接胆红素、甘油三酯和胆固醇等项目的测定。

3、二点速率法

在反应过程中选择适当两点测定其吸光度，计算出单位时间（常为分钟）内吸光度的变化量，通过吸光度的变化量计算待测物质浓度的方法。二点速率分析法主要用于Jaffe法测定肌酐。

4、速率A法

根据酶促反应的特点，当底物浓度足够大，当酶促反应达到最大时，单位时间内底物的消耗量和产量的生成量维持不变，即单位时间内吸光度变化值不变，在酶促反应的零级反应区内选取两个时间点，计算出每分钟吸光度变化，吸光度变化值同酶活性大小成正比。速率A法常用于酶活性的测定。

以上各种分析法可同时选用双波长法。双波长法指在测定时选择主波长和副波长，主波长用于待测物质的测定，而副波长用于消除可能产生的干扰。副波长选择原则为干扰物质在主波长和副波长的光吸收相等，而等测物质有最小的吸光度，两波长不能相隔太近。

主要是针对流动比色的全自动或半自动仪器的参数，原则是吸人量不得大于或等于反应液总体积，否则会导致吸空形成比色池气泡，最好留100～200ul的余地。

酶促反应延迟期后，在过量底物的存在下，反应速率加快并达到一个反应速率稳定的阶段，即酶促反应以恒定的速率进行，不受底物浓度的影响，这段时间称为线性反应期或零级反应期，自动化生化分析仪的监测时间即为此期。测酶的连续监测法至少90—120s或至少4点(3个AA)，少于3个△A不能称为连续监测法，因为不能计算线性度。监测时间过长则容易发生底物耗尽，可测范围变窄。

一点法和两点法必须设置标准，选择合格的标准品很重要。有些试剂盒配有标准液，但是部分项目标准液定标偏差太大，校准液复溶后分装冷冻保存，只要复溶的水质保证，避免反复冻融，校准的结果还是很满意的。注意校准液靶值获得的方法学，方法不同耙值是有差异的，比较典型的是ALP测定有IFCC和DGKC法，差异比较大，不可简单套用。2．9 K值速率法测定无需带标准或做标准曲线，首先确定样本量和工作试剂量，再根据被测物质的摩尔消光系数，就可按速率法计算公式计算出因素K值了。K=TV×10。／(8×SVXL)，TV为反应液总体积，sV为样本体积，L为比色杯光径(em)，￡为毫摩尔消光系数。

有的生化仪要求设置试剂吸光度上下限，主要是用来监测试剂的质量的，但是试剂吸光度上限和下限不是试剂质量的唯一指针。因此，一定的校准频率和室内质控是质量保证的必需手段。我们在实际工作中就遇到酶活力测定的试剂空白数据在规定限值内，但质控物测定结果连续偏低，病人结果因每天标本少而难以判断，最后发现是试剂质量下降。

试剂盒的线性范围与试剂质量、反应时试剂样品比有关，应实测试剂盒的线性范围。当样品浓度低于线性下限应增加样品量重测，而高于线性上限则应稀释后重测。使用任何一种方法测定某待测物时，待测物都有一个可测定的浓度或活性范围，样品结果若超过此范围，仪器将显示测定结果超过线性范围的提示，多数分析仪会自动将样品减量或增量重新测定。

自动生化分析仪的参数设置，包括分析方法、波长、吸样量、检测时间、标准液浓度、试剂吸光度上下限以及线性范围，缺一不可，不同仪器的参数设置可能有所差异，本文就贝克曼DXC系列的设置做下简易的说明。