色谱柱如何验收

　　实验室如何对仪器验收，以常规高效液相色谱仪（HPLC）为例，给出进行验收时需要核查的仪器模块、核查参数、典型的可接受标准，对每个仪器模块和参数核查提供了相应的核查方法。表中所列技术指标仅供参考，实验室本身需求确定仪器核查的项目参数，并设定参数的可接受限。

　　HPLC验收核查表

　　E.1 泵

　　E.1.1 泵耐压

　　将仪器各部分连接好，以 100%甲醇（或纯水）为流动相，流量为 0.2 mL/min，

　　按说明书启动仪器，压力平稳后保持 10 min，用滤纸检查各管路接口处是否有湿

　　剂。卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的

　　90%，保持 5 min 应无泄露。

　　E.2 自动进样器

　　在样品盘上均匀选取 10 个点，将样品瓶加 1mL 纯水，分别放置在这 10 个

　　点上，铂电阻置于样品瓶内。温度稳定 30 min 后开始测量，设定值与 10 个点的

　　温度平均值的差值即为温度准确性。设定温度可选取 10 ℃ 和 40 ℃ ，或依据仪器

　　条件或实验要求进行选择。

　　E.3 柱温箱

　　将温度计探头放置在柱温箱中部，分别测试 40 ℃ 和最高可控温度的 90%处的温度值，每 10 分钟记录一次，记录 7 次，共计 60 分钟，计算平均值。设定值与平均值之差即为柱温准确度。在 40 ℃ 下，7 次测量值的最大值与最小值之差即为柱温稳定性。

　　E.4 检测器

　　E.4.1 紫外 -可见光检测器及二极管阵列检测器

　　E.4.1.1 波长示值误差与波长重复性

　　在仪器内置波长准确度和调整的测试程序时，优先按照仪器自带测试程序进

　　行检测；在无自带测试程序时，选用标准溶液进行检测。方法如下：

　　流动相：15%乙腈-水溶液；色谱柱：RP18，5 µm 30-50 x2,1-4.6 mm 或者 2.0m×0.12 mm ID 毛细管柱；柱箱温度：40 ℃ ；流速：1.0 mL/min（使用 15％的乙腈-水溶液）；注射量：20 µL。

　　用注射器将紫外标准溶液重铬酸钾（标准波长 235 nm，257 nm， 313 nm 和350 nm）从检测器入口注入样品池中冲洗，并将池充满，将检测器波长调到低于标准波长 5 nm 处，调检测器波长，每 10 s 改变 1 nm，工作站记录所得到的折线，折线的最高点（或最低点）对应的波长与标准溶液波长之差为波长示值误差。每个波长重复测量 3 次，其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。

　　用注射器将紫外标准溶液咖啡因（标准波长 273 nm）从检测器入口注入样品池中冲洗，并将池充满，将检测器波长调到低于标准波长 5 nm 处，调检测器波长，每 10 s 改变 1 nm，工作站记录所得到的折线，折线的最高点（或最低点）对应的波长与标准溶液波长之差为波长示值误差。每个波长重复测量 3 次，其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。

　　有吸光值显示的检测器，改变波长时可直接读出吸光度值，其最大（或最小）吸光值对应的波长与参考波长之差为波长示值误差。有波长扫描功能的仪器可画出标准溶液的光谱曲线，其波峰（或波谷）对应的波长与参考波长之差为波长示值误差。对于有内置标准滤光片可进行自检的仪器可直接采用其测量数据。

　　E.4.1.2 基线噪声

　　将输液泵与检测器的“入口”相连，检测器的信号输出端与色谱数据工作站（或记录仪）连接，流动相为二次蒸馏水，泵流量设定 1.0 mL/min，运行系统，记录基线 1 h。

　　开机预热后，记录基线 1 h。选取所记录基线中噪声较大的 5min 作为计算噪声的基线，以 1 min 为界画平行包络线，按公式（4）计算基线噪声。5 个平行包络线宽度的平均值，作为检测器基线噪声。

　　E.4.1.3 基线漂移

　　将输液泵与检测器的“入口”相连，检测器的信号输出端与色谱数据工作站（或记录仪）连接，流动相为二次蒸馏水，泵流量设定 1.0 mL/min，运行系统，记录基线 1 h。

　　开机预热后，记录基线 1 h（如图 5 所示），取 1 h 内平行包络线的中心线的

　　起点与终点的差值为检测器基线漂移。

　　E.4.2 荧光检测器

　　E.4.2.1 波长示值误差和重复性

　　1. 连续波长：萘-甲醇 290 nm（激发），330 nm（发射）注入 1×10-7g/ml 萘-甲醇标准物质，冲洗检测池并将其充满。调整激发波长为 290 nm，发射 325 到335 nm，每 5 s 到 10 s 改变 1 nm，记录每个波长下的吸收值，曲线最高点对应的波长与参考值波长之差为发射波长的示值误差

　　2. 使用去离子水，调整波长 350nm，397nm。

　　E.4.2.2 基线噪声

　　开机预热后，记录基线 1 h。选取所记录基线中噪声较大的 5 min 作为计算噪声的基线，以 1 min 为界画平行包络线（如图所示），按公式计算基线噪声。5 个平行包络线宽度的平均值，作为检测器基线噪声。将输液泵停止运行（此时检测池内充满二次蒸馏水），记录静态基线 5 min，计算短期基线噪声。

　　E.4.2.3 基线漂移

　　将输液泵与检测器的“入口”相连，检测器的信号输出端与色谱数据工作站（或记录仪）连接，流动相为二次蒸馏水，泵流量设定 1.0 mL/min，运行系统，记录基线 1 h。开机预热后，记录基线 1 h，取 1 h 内平行包络线的中心线的起点与终点的差值为检测器基线漂移。

　　E.4.3 示差折光检测器

　　E.4.3.1 基线噪声

　　开机预热后，记录基线 1 h。选取所记录基线中噪声较大的 5 min 作为计算

　　噪声的基线，以 1 min 为界画平行包络线（如图 4 所示），按公式（4）计算基线

　　噪声。5 个平行包络线宽度的平均值，作为检测器基线噪声。将输液泵停止运行

　　（此时检测池内充满二次蒸馏水），记录静态基线 5 min，计算短期基线噪声。

　　E.4.3.2 基线漂移

　　将输液泵与检测器的“入口”相连，检测器的信号输出端与色谱数据工作站（或记录仪）连接，流动相为二次蒸馏水，泵流量设定 1.0 mL/min，运行系统，记录基线 1 h。开机预热后，记录基线 1 h，取 1 h 内平行包络线的中心线的起点与终点的差值为检测器基线漂移。

　　E.4.4 蒸发光检测器

　　E.4.4.1 基线噪声

　　选用 C18 色谱柱，将仪器各部分连接好，以甲醇为流动相，流量为 1.0 mL/min，

　　漂移管温度 70 ℃ （低温型 35 ℃ ），雾化气体流量为（2.5～3.0）L/min 或适当的气

　　体压力（280～350）kPa，灵敏度选择在适当的挡位，接通电源，待仪器稳定后

　　记录基线 1 h，计算参照示差检测器。

　　E.4.4.2 基线漂移

　　计算参照示差检测器。