芽鞘伸长法测定生长素类物质的浓度和效价实验

实验方法原理：生长素（吲哚乙酸）能促进燕麦胚芽鞘细胞的伸长。在切去顶端的芽鞘切段断绝了生长素来源的情况下，切段的伸长在一定范围内与外加生长素浓度的对数呈线性关系，因此，可以用一系列已知浓度的生长素溶液培养芽鞘切段，绘制成生长素浓度与芽鞘伸长的关系曲线，以鉴定末知样品的生长素含量。

实验材料：小麦、燕麦种子

试剂、试剂盒：IAA溶液、磷酸－柠檬酸缓冲液 

仪器、耗材：培养皿、滤纸、细玻璃丝、镊子、简易切割器、刻度吸管、带方格纸的玻璃板、恒温箱、搪瓷盘、暗室、易切割器   

实验步骤：

一、材料和设备

小麦或燕麦种子

培养皿，滤纸，细玻璃丝，镊子，简易切割器，刻度吸管，带方格纸的玻璃板，恒温箱，搪瓷盘，暗室。

简易切割器可用木，钢或有机玻璃和两片双面刀片制成，两刀片间距离为6毫米。

10^－3 M  IAA溶液：精确称取 17.5 毫克吲哚乙酸，溶于含有2%蔗糖的磷酸－柠檬酸缓冲液中，并以该溶液定容到100  ml 。

含2%蔗糖的磷酸－柠檬酸缓冲液（pH5.0）：取K2HPO41.794 克，柠檬酸 1.019 克，蔗糖 20 克，溶于1000 ml 蒸馏水中。

二、实验步骤

选品种纯而健全的小麦或燕麦籽粒100粒，浸入饱和的漂白粉溶液中，数小时后取出用蒸馏水洗净播种在有洁净滤纸或石英砂带盖的搪瓷盘中，为使胚芽鞘长得直，可将种子排齐，种胚向上并一律朝向一侧，将盘斜放成45?角，使胚倾斜向下，盘中适当加水并加盖，放在暗室中生长，室内温度保持25℃，相对湿度85%。

播种后三天，当胚芽鞘长约25－35毫米时，精选芽鞘长度一致的幼苗50株，用镊子从基部取下芽鞘，用切害虫器在带方格的玻璃板上切下离芽鞘顶端3毫米，长度为5－6毫米的切段（见图8）50段，立即放入含有2%蔗糖的磷酸缓冲液中（0.01 M ，pH4.5），浸泡1－2小时，以洗去内源生长素。

洗净并烘干五套培养皿，编号，在各培养皿中加入9  ml 含有2%蔗糖的磷酸缓冲液。然后在①中加入10^_－3 M 的吲哚乙酸缓冲液1  ml ，摇匀，即成含吲哚乙酸10^－4 M 的缓冲液；然后从①中吸出1  ml 注入②中，摇匀，即成10^－5 M 的溶液，如此继续到④号皿，配成10^－7 M 的溶液，并吸出1 ml 弃去。⑤中不加吲哚乙酸作为对照。

将胚芽鞘切段从缓冲液中取出，用滤纸轻轻吸干，将切段穿在玻璃丝上，每一培养皿中放入10段芽鞘，加盖，放在25℃温箱中培养。以上操作，应全部在较弱的红光下进行。

24小时后取出，吸去溶液，用米尺测量其长度，精确到0.1毫米，求出每种处理的平均长度，然后以生长素溶液中的长度和对照中的长度作比较（L/L），以此值作纵座标，以吲哚乙酸浓度的对数作横座标画出标准曲线。

若有末知浓度的生长素提取液或其它类似生长素溶液，需要测其浓度或效价时，均可依上法求L/L。然后查标准曲线，即可求得。