草胺膦抗性基因bar的原核表达与蛋白质纯化

[摘　要]　通过PCR 扩增, 从pCAMB IA 13002bar 质粒中获得bar 基因编码区全长, 经酶切鉴定和测序后证实,bar 基因分离成功。用B amHÉ 和H indË 酶切, 将bar 基因与原核表达载体pET 28a (+ ) 连接, 构建成重组质粒pET 28bar。将重组质粒pET 28 bar 转化大肠杆菌菌株BL 21 (DE3) 后, 获得高效表达。SDS2PA GE 电泳分析显示, 目的蛋白
主要以包涵体形式存在, 蛋白质分子量约为27 ku。将包涵体离心、洗涤和纯化后, 得到高纯度的目的蛋白。该蛋白可以替代植物外源蛋白进行转bar 基因产品的食用安全性检测, 也可用于转bar 基因产品EL ISA 检测的抗体制备。