1 荧光素与抗体结合（标记）
2 荧光抗体的纯化
3 荧光抗体的鉴定
1.荧光素与抗体结合方法：
⑴ 透析法：①适用于蛋白质含量低、样品体
积小的抗体溶液的标记
②标记较均匀，非特异荧光较低
⑵ 搅拌法：①适用于蛋白质含量较高、样品
体积较大的抗体溶液的标记
②标记时间短、效率较高，荧光
素用量节省
③影响因素多，非特异荧光较强
**透析法
第一步： 将含10mg/ml的Ig溶液10ml
装入透析袋。
第二步： 将上述透析袋放入烧杯中 ：
含0.1mg/ml FITC的
pH=9.4的碳酸盐缓冲液100ml。
第三步： 4℃磁力搅拌24h。
第四步： 取出透析袋，进行纯化、鉴定
**搅拌法
第一步： 将含40mg/ml BP 溶液5ml
装入反应瓶中。
第二步： 加入pH=9.0、0.5mol/L碳酸盐
缓冲液4ml
第三步： 25℃磁力搅拌下，逐滴加入
1ml含2mg的FITC溶液
第四步： 25℃下搅拌1h，4℃下继续搅拌
4h，然后进行纯化、鉴定
2. 荧光抗体的纯化：
⑴ 除去未结合荧光素
⑵ 除去标记不适当的抗体
⑶ 除去非特异反应物质
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(1)除去未结合荧光素：
A 透析法：