荧光法测定水中的微量硒

一、方法要点

硒是人体必需元素，大骨节病、克山病生于水、粮食中含硒极低的环境。因此，需要准确可靠的测定方法，本法可准确测定硒低于0．05μg／L。

二、试剂与仪器

(1)盐酸羟胺：1％溶液。

(2)氯化铵：25％溶液。

(3)EDTA-2，Na盐：0．1mol／L溶液。

(4)氯化钙：3％溶液。

(5)甲酚红指示剂(0．2％)：称取0．2g甲酚红溶解于少量蒸馏水中，加2滴氨水(1+1)，用蒸馏水稀至100mL。

(6)2，3-二氨基萘(DAN)：称取DAN 0．2g于盛有．200mL 0．1mol／L盐酸的具塞锥形瓶中，置康氏振荡机上振摇30min，用2号砂芯漏斗过滤，用10mL环己烷反复萃取4次，贮棕色瓶中，置冰箱保存(暗室配制)。若放久，用前再用环己烷萃取一次。

(7)硒标准溶液：准确称取100mg金属硒粉于100mL烧杯中，盖一表面皿，小心地加入5mL浓HNO₃。稍加热溶解，用蒸馏水定容至1000mL容量瓶中，此溶液浓度为100μg／mL。再用0．1mol/L盐酸配成0．05μg/mL的硒标准溶液。

(8)FP-550型荧光分光光度计。

三、分析步骤

将水样用微孔滤膜(0．45μm)或慢速定量滤纸过滤。测定所用水样的体积按其含硒量而异：含硒约1μg／L时，取水样100mL；0．5μg／L时，取200mL，直接放入250mL具塞锥形瓶；含硒量在0．2μg／L以下时，取500mL，放入500mL烧杯中，加甲基橙指示剂2滴，用0．1mol／L盐酸调至橙红色(已酸化水样，用0．1mol／L NaOH调至橙红色)并过量2mL，加2．5mL氯化钙溶液，再加0．1mol/L KMnO₄ 3滴，置砂浴上蒸发，紫色消失应再加KMnO₄。始终保持溶液呈紫红色，若有MnO₂沉淀出现，并不妨碍测定，当水样体积蒸至150mL左右，移入250mL具塞锥形瓶，然后用少许蒸馏水冲洗，并借带塑胶头的玻棒擦洗烧杯壁数次。再加5mL 0．1mol/L NaOH(用广泛pH试纸检查，溶液pH值应在8以上)。继续蒸发至约3mL。取下放凉。沿瓶壁周围加6mL浓盐酸和10mL氯化铵溶液。置沸水浴上加热(10±0．5)min，将锥形瓶取下加20mL蒸馏水、5mLEDTA和2mL盐酸羟胺，后加甲酚红指示剂1滴，用氨水(1+1)调节至由紫红色变成橙黄色，即pH值约为1．5。

然后在暗室内加4mL DAN，摇匀，置沸水浴上加热7min，取下放入冷水中稍冷，加5mL环己烷，置康氏振荡机上振摇4min，静置数分钟。倾入分液漏斗中分液，将有机相移入5mL具塞试管。与水样测定相同，取等体积蒸馏水4份，两份作空白，两份加硒标准液0．05μg或0.1μg，进行测定。激发波长380nm，荧光波长520nm，比色皿厚为1cm。

结果计算：
标准Se(μg)
—————————
标准值一空白值
Se(μg/L)=(样品值一空白值)———————————×1000

四、注意事项

Se6+还原至Se4+的盐酸浓度必须在4mol／L以上，将Se6+定量还原至Se4+。