薄层色谱点样选购指南、操作技巧、注意事项（一）

薄层色谱点样

点样方法

点样除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。点样直径不超过5mm，点样距离一般为1~1.5cm即可。样品在溶剂中的溶解度很大，原点将呈空心环——环形色谱效应。因此配制样品溶液时应选择对组分溶解度相对较小的溶剂。点样方式有点状点样和带状点样。

怎样提高点样效率?

点样是造成TLC定量误差的主要来源。实验证明：定量毛细管更适合较小体积的点样；微量注射器更适合较大体积的点样。这主要是因为微量注射器受小气泡、溶液回爬现象的影响较大。为避免不同定量毛细管间的点样误差、建议一块薄层板上最好用同一只定量毛细管。但应注意更换样品时，应将毛细管用超1声bo或不同极性溶剂清洗干净。在制备样品时，溶样溶剂黏度不能过高，以便于点样；溶剂沸点过低则进样体积易变，过高则会改变展开剂组成；对样品溶解度过高会使样点发生空心现象；常用的溶剂为甲醇、乙醇、**。经典TLC样点原点一般为直径3mm点间距1--2cm 底边距1.5cm；HPLC样点原点一般为直径1mm点间距5mm 底边距1cm。

不同溶剂对样品的洗脱能力不同，因此在点样的同时，样品在原点开始呈环形展开，如果样品在溶剂中的溶解度很大，原点将变成空心环，Kaiser称这种现象为“点样环形色谱效应”。这种效应对随后的线形展开造成不良影响，因此配制样品溶液时应选用对组分溶解度相对较小的溶剂；溶剂的粘度不宜过高，以便于点样，溶剂的沸点要适中，沸点过低由于挥发会改变样品溶液浓度导致较大误差，沸点过高，样品溶液的溶剂会在原点残留，导致改变展开剂的选择性，特别是样品溶液的溶剂与展开剂的极性相差较大时更为明显，最常用的溶剂为甲醇及乙醇，有时也用丙酮。点样后必须将溶剂全部除去后再进行展开，但要避免高温加热，以免改变待测成分的性质。（长沙德之瑞仪器科技有限公司定量毛细管）

点样方式、点样量及点样设备的选择决定于分析的目的、样品溶液的浓度及被测物质的检出灵敏度。

点样体积经典薄层一般为1-5μl，高效薄层为100-500nl，样品溶液浓度一般在0.01%-1.00%范围内，点样过多会造成原点“超载”，展开剂产生“绕行”现象使斑点拖尾或重叠，使扫描峰形不对称或不能基线分离，并由于超载得到非线性的校正曲线，严重影响定量结果，降低准确度。

经典薄层的原点直径最大不得超过5mm，一般3mm较为合适，高效薄层原点直径约为1-2mm，尽可能避免多次点样，原点直径过大会降低分辨率及分离度。

经典薄层起始线距底边约1.5cm，高效薄层为1cm，展距前者为10-15cm，后者为5-7cm，对于难分离的化合物用多元展开剂展开时，注意原点与展开剂的距离每次要保持一致，否则由于色谱分离最初行为的差异而导致分离失败。

点与点的间距经典薄层为1-2cm，高效薄层为0.5cm，用具自动换行功能的薄层扫描仪时，斑点之间的距离必须十分精确，才能正确地扫描每行的色斑，得到好的测定结果，图7-3-1为一般的点样图解。

在点样前，应将薄层板在日光及紫外光下检查板面有无损坏或污染，选择合格的薄层板后决定用点状点样还是用带状点样。为此，瑞士CAMAG公司生产了系列点样设备以供选用，这些设备只适用于硬板。下面是常用的点样方式及设备。 （长沙德之瑞仪器科技有限公司定量毛细管）

（一）点状点样

如果仅仅为了定性，用内径约0.5mm管口平整的毛细管或微量注射器将样品溶液点在距薄层底边约2cm处，点样直径不超过5mm，点间距约为1-1.5cm即可。

为进行定量，借毛细作用吸样的定容管有两种，一是容积为0.5、1、2、3、4及5μl的德之瑞定量毛细管（Microcaps），另一种是100及200nl的铂铱合金定量毛细管（Nanopipette）；注射器式的可变体积的点样器有50-230nl的毫微点样器（Nano-Applicator）及0.5-2.3μl的微量点样器（Micro-Applicator），用于需要调节体积及没有毛细作用的键合相薄层的点样。

毛细管式的微量点样器装在手动的Nanomat型点样装置的磁性点样头上，点样头装在弹簧上。按下此点样头，毛细管借恒定的压力接触薄层表面。点间距离由带准确的#44 间隔的E字形缺刻装置控制，CAMAG Nanomat Ⅲ型手动点样器，适用于普通或高效薄层板，点样体积精确，样品原点小，原点间隔定位准确；注射器式的毫微点样器及微量点样器由测微尺控制，也可与Nanomat型点样装置配合，以使点样位置精确。

电动的Nanomat Ⅲ型点样装置完全适用于上述各种点样器的配套使用，并且还可以自动控制点样次数，点样器在薄居上的停留时间，以及点样器接触薄层的速度。还可避免手持毛细管点样时的用力不匀，由于靠机械控制接触板面，压力恒定。此外，还有可以用于环形展开及向心展开的薄层点样装置。