虎杖中游离羟基蒽醌成分的提取和分离

虎杖粗粉

乙醇 乙醚 蒸馏水 碳酸氢钠 盐酸 碳酸钠 醋酸镁试剂 氢氧化钠 KOH喷雾 氨蒸气

圆底烧瓶 三角瓶 分液漏斗 pH计 玻璃棒 烘箱 抽滤瓶 电子天平 硅胶-CMC

一、提取

乙醇总提取物的制备：取虎杖粗粉200g，于1000ml圆底烧瓶中回流，第一次加500ml乙醇回流一小时，第二次加300ml乙醇回流30分钟，第三次加250ml乙醇回流30分钟，合并三次乙醇提取液，放置，如有沉淀可过滤一次，滤液减压回收乙醇至干，得膏状物。

二、分离

1.亲脂性成分与亲水性成分的分离：

将上述膏状物加水10ml，乙醚100ml充分振摇后放置，将乙醚液倾于500ml三角瓶中（水层不可倒出），再于烧瓶中加50ml乙醚振摇，放置，倾出乙醚液，同法操作六次，合并乙醚液即为亲脂性成分--总游离蒽醌，乙醚提取过的剩余物中含水溶性成分。

2.游离蒽醌分离：

（1）强酸性成分的分高：将上述含总游离蒽醌的乙醚液置100ml分液漏斗中，加5%碳酸氢钠水溶液40ml萃取（测5%碳酸氢钠PH值），放置使充分分层，若提取过程中乙醚挥发可补充，分出碱水溶液同法提取二次，合并碱水提取液，在搅拌下缓缓滴加6N盐酸调至pH2注意观察颜色变化，稍放置即可析出沉淀，抽滤，用水洗涤沉淀中性，将沉淀置表面器上干燥，得强酸性成分。

（2）中等酸性成分--大黄素的分离：碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液（测5%碳酸钠水溶液的pH值）萃取5——9次，每次40ml，直至萃取液较浅为止。合并碳酸钠提取液，小心加盐酸调pH3，放置，抽滤，水洗沉淀至中性，抽干，干燥称重。以甲醇一氯仿或苯一氯仿（1：1）重结晶，得大黄酚和大黄素6-甲醚混合物。

（3）中性成分--甾醇类化合物分离：氢氧化钠萃取过的乙醚液，用水洗至中性，以无水硫酸钠脱水，回收乙醚得残留物，以甲醇热溶二次（10ml,5ml）过滤合并甲醇液，浓缩，放置结晶，滤取沉淀并用少量石油醚洗涤，再用甲醇重结晶，得β-谷甾醇，mp136——137℃，取少许结晶，做醋酐--浓硫酸反应，观察现象。

三、鉴定

1.化学检识：分别取大黄素、大黄酚等少许，用乙醚溶解，做如下反应：

A：碱液试验：取试液1ml，加20%NaOH数滴，观察颜色。

B.醋酸镁反应：取试样1ml，加醋酸镁试剂数滴，观察现袋。

2.薄层鉴定：

吸附剂：硅胶-CMC

展开剂：C6H6-EtoAc（3:2或97：9）。

显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH喷雾。

大黄酚和大黄素6-甲醚二者相互分离比较困难，在本实验薄层条件下为同一斑点，可用层析用磷酸氢钙进行柱层析，以石油醚洗脱，下层黄色带洗脱后，以甲醇重结晶可得大黄酚，上层黄色带洗脱后以甲醇重结晶可得大黄素6-甲醚。

虎杖中主要成分的结构与性质：

1.大黄素（Emodin）：橙黄色长针晶（丙酮中结晶为橙色，甲醇中结晶为黄色），mp256-257℃。几不溶于水，对于下列溶剂的溶介度分别为：四氯化碳0.01%，氯仿0.0718%，二硫化碳0.009%，乙醚0.14%，苯0.0415。易溶于乙醇，可溶于氨水，碳酸钠和氢氧化钠水溶液。

2.大黄酚（Chrysophanol）：金黄色六角型片状结晶（丙酮中结晶）或针状结晶（乙醇中结晶）。mp 196℃，能升华。易溶于乙醚、氯仿、苯、冰乙酸、乙醇， 稍溶于甲醇，难溶于石油醚，不溶于水、碳酸氢钠和碳酸钠水溶液。可溶氢氧化钠水溶液及热碳酸钠水溶液。

3.大黄素6-甲醚，（Emodinmonomethl ether）：金黄色针晶，mp207℃，能升华。可溶于氢氧化钠水溶液，溶解度与大黄酚相似。

4.大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷（Anthraglycosibe A）：黄色针晶（稀甲醇中结晶）mp230-232℃。

5.大黄素3-D-葡萄糖苷（Anthraglycoside B）：浅黄色针晶（稀乙醇中结晶含1分子水mp190-191℃。

6.白藜芦醇（Resveratrol）：无色针状结晶，mp256-257℃，216℃升华，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。

7.白藜芦醇葡萄糖苷（polydotinpeceid）：无色颗粒状结晶，双熔点分别为130-140℃,225-226℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水，可溶于乙酸乙酯、可溶于碳酸钠和氢氧化钠水溶液中，稍溶于冷水，难溶于乙醚。

8.β-谷甾醇

9.鞣质：属缩合鞣质，可溶于醇及水，不溶于苯、乙醚、氯仿等。

另外。虎杖叶、茎中含少量羟基蒽醌类化合物、有机酸、槲皮苷、异槲皮苷、虎杖黄酮苷、扁蓄苷、金丝桃苷及芸苷、Vtio等。