蛋白的的原核表达及其对同源性感染的免疫保护性研究

实验概要

用鸡艾美尔球虫的SO7基因与重组质粒pMG36t 结合，再把pMG36t-SO7导入到 E. coli χ13 体内，选择阳性的E. coli χ13( pMG36t-SO7 )即： E. coli χ2，然后用它去免疫，分析免疫效果。

实验原理

通过原核表达系统大肠杆菌来表达柔嫩艾美耳球虫的一个抗原基因SO7，把纯化出来的蛋白进行免疫，首免和二免后感染，观察免疫效果。

主要试剂

T4DNA连接酶；限制性内切酶；质粒小提试剂盒；DNA胶回收试剂盒

主要设备

PCR仪；伯乐电泳仪；台式高速冷冻离心机

实验材料

鸡：一日龄的SPF 鸡。

球虫：北京艾美耳球虫强毒株。

细菌：胸苷酸酶基因突变以后形成的χ13型的大肠杆菌。

质粒：pMG36e重组质粒是由中国科学院微生物研究所提供的。

实验步骤

1. 构建没有抗药基因的重组表达载体：pMG36t-SO7；
2. 阳性重组大肠杆菌的鉴定和构建的pMG36t-SO7的稳定性鉴定；
3. 用氯化钙处理E. coli χ13 使pMG36t-SO7进入到E. coli χ13体内thyA突变位置处；

4. 用LB培养基培养E. coli χ13，筛选阳性的E. coli χ13，即：E. coli χ2；

5. SO7 蛋白在E.coli χ2里表达的鉴定：用SDS-PAGE和蛋白质印迹法来进行；
6. 用艾美尔球虫卵囊对鸡进行免疫和攻毒。免疫和感染程序见下图：

                     

7. 用E.coli χ2介导的免疫反应；

8. E.coli χ2对同源感染的免疫效果的评估；
9. 数据分析。
 

注意事项

近年来活的弱毒苗已经开始使用了。然而，在使用这种疫苗时安全问题不容忽视，另外，大规模生产活的弱毒苗价格很昂贵，新一代的疫苗，像使用基因重组技术来表达寄生虫抗原，将会产生更好的预防效果。

对于一个成功的重组疫苗来说，一种有效的抗原呈递系统是至关重要的，抗原的入侵途径和抗原的选择也是影响成功的决定性因素。

在感染过程中，针对球虫会产生特异性的抗体，而且这些抗体对处在细胞外阶段的球虫也能发生中和反应。