电泳可用于分离复杂的蛋白质混合物,研究蛋白质的亚基组成以及证实蛋白质的均一性等,还能纯化出蛋白质用于后续的研究工作。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的孔径,蛋白质的电荷、大小、性质等因素共同决定了蛋白质的电泳迁移率。
实验材料 | 蛋白质 |
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试剂、试剂盒 | SDS磷酸 |
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仪器、耗材 | 电泳仪离心机 |
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实验步骤 | 1. 按“Laemmli凝胶电泳法”步骤1~4配制及灌制分离胶,同时凝胶应灌至玻璃平板夹层的顶部,按“Laemmli凝胶电泳法”步骤7,插入样品梳,并让凝胶在室温聚合30 ~60 min。 2. 蛋白质样品与2×磷酸/SDS样品缓冲液按1:1混合,于100℃加热2 min。
3. 按“Laemmli凝胶电泳法”步骤9~3,组装电泳装置和加样,缓冲系统采用磷酸/SDS电极缓冲液,如有空出的加样孔,加入等量的1×磷酸/SDS样品缓冲液。 4. 连接电源进行电泳,对于0.75 mm 厚的凝胶,先以15 mA 电流电泳至示踪染料进入凝胶,在30 mA 下电泳3 h,5 h,8 h或直至染料到达凝胶的底部为止。可能的话,使用温度控制装置以保持凝胶温度在15~20℃。
5. 参照“Laemmli凝胶电泳法”步骤15~18,拆卸电泳装置并取出凝胶。 展开 |
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